Добавить материал и получить бесплатное свидетельство о публикации в СМИ
Эл. №ФС77-60625 от 20.01.2015
Инфоурок / Другое / Другие методич. материалы / Методическая разработка практического занятия "Определение белка в моче" (1 курс)

Методическая разработка практического занятия "Определение белка в моче" (1 курс)

  • Другое

Поделитесь материалом с коллегами:

Занятие №3.

Тема: Определение белка в моче.

Цель: Изучить исследование химических свойств мочи.

Задачи:

  1. Изучить количественные и качественные методы определения белка в моче;

  2. Изучить основные принципы работы с тест-полосками на автоматических анализаторах.

Тип занятия: практическое (6ч)

Планируемые результаты:

Студент должен знать:hello_html_m25ba8015.jpg

  1. Качественные пробы для определения белка.

  2. Метод Робертса – Стольникова.

  3. Определение белка 3 % ССК.

  4. Биуретовый метод определения белка (ТХУ).

  5. Диагностическое значение исследования показателей.

  6. Виды протеинурий.


Студент должен уметь:

  1. Подготовить рабочее место к исследованию мочи.

  2. Приготовить реактивы, посуду и оборудование к исследованию.

  3. Определять химические свойства мочи (белок в моче качественными и количественными методами).

  4. Работать с бланочной продукцией (оформление бланков анализа).

  5. Правильно интерпретировать полученные результаты исследования.


Средства достижения поставленной цели:

1. Работа с конспектами, учебной и специальной литературой.

2. Подготовка к практическим занятиям с использованием методических рекомендаций преподавателя, выполнение и оформление практических работ.

3. Работа с информационными средствами обучения на электронных и бумажных носителях.

Оборудование учебного кабинета и рабочих мест кабинета:

  • посадочные места по количеству обучающихся;

  • рабочее место преподавателя;

  • специализированная мебель и оборудование.

Технические средства обучения:

  • компьютеры для оснащения рабочего места преподавателя и обучающихся;

  • технические устройства для аудиовизуального отображения информации;

  • аудиовизуальные средства обучения (презентация, учебный видеосюжет).

Результатом освоения урока является:

Формирование практических профессиональных умений и первоначального практического опыта, в том числе профессиональными (ПК) и общими (ОК) компетенциями:

ПК 1.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований.

ПК 1.2. Проводить лабораторные общеклинические исследования биологических материалов.

ПК 1.3. Регистрировать результаты проведенных исследований.

ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.


I модуль. Теоретическая часть с элементами самостоятельной работы

Задание №1. Изучите и законспектируйте учебный материал в рабочие тетради.

Моча здорового человека обычно содержит менее 0,002 г/л и редко до 0,012 г/л белка и как правило такое содержание белка в моче называют «в виде следов» и общепринятыми (унифицированными) химическими методами в моче здорового человека не определяется.

Содержание белка в порциях мочи, собранной в разное время суток, может колебаться в значительных пределах.

Появление белка в моче называется протеинурия.

В зависимости от суточной потери белка различают следующие степени протеинурии: умеренная - до 1 г; средняя - от 1 до 3 г; выраженная - более 3 г.

Существует два основных вида протеинурии:

  • Протеинурии, обусловленные заболеваниями мочевыводящих путей;

  • протеинурии, при поражениях (заболеваниях) почек.

Протеинурии, связанные с воспалительными процессами мочевыводящих путей, сопровождаются появлением в моче значительного количества лейкоцитов или эритроцитов, что, однако, не позволяет исключить одновременного попадания белка в мочу из почечной паренхимы; содержание белка редко превышает 1 г/л.

Почечная протеинурия в большинстве случаев связана с повышенной проницаемостью гломерул и делится на 2 группы:

  • физиологическая протеинурия;

  • патологическая протеинурия.

К физиологической протеинурии относят случаи временного появления белка в моче, не связанные с заболеваниями:

  • после приема большого количества пищи, богатой не денатурированными белками (сырое мясо, сырые яйца);

  • при интенсивной мышечной работе (продолжительные походы, спортивные соревнования);

  • при приеме холодной ванны или душа;

  • при сильных эмоциональных переживаниях;

  • при эпилептических приступах.

Различают ортостатическую, или юношескую, протеинурию, встречающуюся у детей и подростков и проходящую с возрастом. В дифференциально-диагностическом отношении имеет практическое значение то, что ортостатическая альбуминурия обнаруживается нередко в период выздоровления после острого гломерулонефрита.

Патологическая почечная протеинурия может быть следствием органических заболеваний почек и других органов и систем: острые гломерулонефриты; хронические гломерулонефриты; острые пиелонефриты; хронические пиелонефриты; нефропатии беременных; различные заболевания, сопровождающиеся лихорадкой; выраженная хроническая сердечная недостаточность; амилоидоз почек; липоидный нефроз; туберкулез почки; геморрагические лихорадки; геморрагический васкулит; выраженная анемия; гипертоническая болезнь и др.

Задание №2. Перепишите и зарисуйте схемы лабораторных методов определения белка в моче.

Лабораторные методы определения белка в моче

Существуют качественные и количественные методы определения белка в моче, они основаны на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота); при этом измерение степени коагуляции делает пробу количественной.

Качественные методы


  1. проба с 20% сульфосалициловой кислотой (унифицированная);

  2. кольцевая проба Геллера (в настоящее время не используется);

  3. обнаружение белка с помощью индикаторной бумаги (полосок) и тест-полосок.

Количественные методы


  1. унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова;

  2. с 3% сульфосалициловой кислотой.

Качественные методы определения белка в моче

Задание №3. Определение белка в моче с помощью унифицированной пробы с 20% сульфосалициловой кислотой

Принцип метода: основан на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота)

Посуда, оборудование и реактивы:


  • 20% сульфосалициловой кислоты (2-гидрокси-5-сульфобензойная кислота C7H506S).

  • фильтровальная бумага

  • 3мл профильтрованной мочи

  • 2 шт. химические пробирки

Ход исследования:


В две пробирки вносят по 3 мл профильтрованной мочи, в одну из них (опытную) прибавляют 6—8 капель сульфосалициловой кислоты. На темном фоне сравнивают обе пробирки.

Интерпретация полученных результатов:

Помутнение в опытной пробирке свидетельствует о наличии в моче белка — проба положительна.

Примечание. Мочу со щелочной реакцией перед исследованием подкисляют добавлением нескольких капель 10% раствора уксусной кислоты

hello_html_m5aabad03.jpg

Задание №4. Определение белка с помощью кольцевой пробы Геллера

Принцип метода: В основу положена кольцевая проба, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота – моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Посуда, оборудование и реактивы:


- химическая пробирка;

- реактивы: 30% раствор азотной кислоты (HNO3) (d = 1,2) или реактив Ларионовой: 20— 30 г хлорида натрия (NaCl) растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, остужают, фильтруют; к 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной HNO3.

Ход исследования:


В пробирку наливают 1 — 2 мл 30% раствора HNO3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.

Интерпретация полученных результатов:

Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин тонкого белого кольца указывает на наличие белка в моче.


Зарисуйте схему определения белка


hello_html_m37b6536a.jpg



Количественное определение белка

Принцип метода: В основу положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота — моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Посуда, оборудование и реактивы:


  • Химическая пробирка;

  • Реактив Ларионовой;

  • Фильтровальная бумага;

  • Биологическая жидкость (моча);

  • Дистиллированная вода.

Ход исследования:


В пробирку наливают 1 - 2 мл 30% раствора HNO3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.

Интерпретация полученных результатов:

Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин
тонкого белого кольца указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. При появлении кольца раньше 2-х мин после наслаивания мочу следует развести дистиллированной водой и провести повторное исследование с разведенной мочой. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, его ширины, компактности и времени появления.

При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком — в 4 раза, при компактном — в 8 раз и т.д. Концентрацию белка вычисляют, умножив степень разведения на 0,033 г/л.

Примечание:

Белое кольцо может образовываться при наличии большого количества уратов; в отличие от белкового оно появляется немного выше границы двух жидкостей и растворяется при легком нагревании.

Задание №6. Определение количества белка в моче с 3 % сульфосалициловой кислотой


Принцип метода: Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой

Посуда, оборудование и реактивы:


  1. 3% раствор сульфосалициловой кислоты (C7H5O6S); j

  2. 0,9% раствор хлорида натрия;

  3. 1% стандартный раствор альбумина - 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.

Ход исследования:


В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора хлориде натрия. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построение которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу). Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Приготовление разведений для построения калибровочного графика

пробирки

Стандартный раствор, мл

0,9% раствор хлорида натрия, мл

Концентрация белка, г/л

1

0,05

9,95

0,05

2

0,1

9,9

0,1

3

0,2

9,8

0,2

4

0,5

9,5

0,5

5

1,0

9,0

1,0


Примечание:

Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгеноконтрастных соединений. Ложноположительные J реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Зарисуйте схему определения белка


hello_html_3e44c71e.jpg


Задание №7. Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса

Принцип метода: основан на реакции термопреципитации

Посуда, оборудование и реактивы:


Реактив: 2М ацетатный буфер рН 4,9.

Профильтрованная моча;

Водянная баня.


Ход исследования:


4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл буферного раствора и нагревают 15 мин на водяной бане при температуре 56°С.

Интерпретация полученных результатов:

При наличии в моче белка Бенс-Джонса уже в первые 2 мин появляется выраженный осадок.

Примечание:

При концентрации белка менее 3 г/л проба может быть отрицательна, что встречается довольно редко, так как обычно концентрация белка Бенс-Джонса в моче весьма значительна.

Наиболее достоверно выявление белка Бенс-Джонса осаждением при температуре 40—60°С. Однако в слишком кислой (рН менее 3,0) или слишком щелочной (рН более 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и низкой концентрации бежа Бенс-Джонса (менее 3 г/л) осаждение может не происходить.

Зарисуйте схему определения белка




hello_html_63042d84.jpg




II модуль. Самостоятельная работа с исследовательским этапом

Методические установки:

Задание №1. Изучите и законспектируйте приложение №1 «Обнаружение белка с помощью диагностических тест-полосок»

Задание №2.

- Получите образцы биологической жидкости (мочи) у преподавателя, пронумеруйте образцы;

- Проведите исследование мочи с помощью диагностических тест-полосок;

- Оцените полученный результат (норма, патология). Предположите причину возникновения белка в моче.

- Результат запишите в бланки анализа, сдайте их преподавателю.



Приложение №1

«Обнаружение белка с помощью диагностических тест-полосок»

Принцип. Белок изменяет цвет индикатора, нанесенного на полоску. Индикаторы упакованы в комплекте по 100 полосок, которые хранятся в плотно закрытом пенале, прохладном и сухом месте.


Правила работы с диагностическими тест-полосками

При работе с диагностическими тест-полосками необходимо соблюдать следущие правила:

- держать диагностические тест-полоски в плотно закрытых упаковках-пеналах;

- хранить пеналы в темном, сухом, прохладном месте при температуре, не превышающей 30ºС, но не в холодильнике;

- не подвергать полоски действию влаги и прямого солнечного света, высокой температуры и летучих химических веществ;

- доставать только строго необходимое количество полосок, после чего немедленно закрывать пенал;

- не дотрагиваться пальцами до диагностических зон.

Правила проведения теста

1. Для исследования используйте утреннюю мочу, собранную в одноразовый пластиковый контейнер для мочи (или чистую сухую посуду). Перемешайте доставленную мочу, но не центрифугируйте.


Внимание!

При использовании нестандартной приспособленной тары остатки моющих средств в посуде для сбора мочи являются причиной ложных результатов.


2. Из пенала возьмите тест-полоску.

3. Сразу же закройте пенал фабричной крышкой, полоску охраняйте от влаги.

4. Индикаторные бумажные зоны полоски опустите на 2-3 секунды в исследуемую мочу и сразу же выньте.

5. Для удаления избытка влаги с диагностических зон полоски проведите ее длинным краем по краю контейнера (или иной емкости, в которой доставлена моча) или приложите этот край полоски к фильтровальной бумаге.

Смывать с диагностических зон полоски лишнюю мочу нельзя!!!

6. По истечении времени, указанного на этикетке пенала или в инструкции к каждому тесту, сравните цвет соответствующей диагностической зоны с цветной шкалой на этикетке пенала с полосками (эталоном). Порядок проведения теста представлен рисунками 1-7.

7. Реакцию оценивают как положительную или отрицательную. Или выражают в цифровом обозначении в г/л. (см. рисунок №8).



hello_html_98449b7.jpg

hello_html_m2beaf422.jpg

hello_html_m30c55f51.jpg







hello_html_m26c19610.jpg

Рис. №8 Оценка результатов исследования


III Модуль. Контрольные вопросы и задания

  1. Ответьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь

  1. Расскажите метод определения белка в моче 50% азотной кислотой.

  2. Расскажите метод определения белка в моче 20 % ССК.

  3. Расскажите методику определения белка в моче методом Робетса – Стольникова – Бранберга.

  4. Расскажите методику определения белка в моче диагностическими тест- полосками.

  5. Какие существуют правила работы с диагностическими тест-полосками.

  6. Назовите основные критерии правильно проведенного теста.

  7. Расскажите методику обнаружения в моче белка Бенс-Джонса.

  8. Диагностическое значение определения химических свойств мочи.

  9. Клиническая оценка химических свойств мочи.

  1. Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение, используя изученный материал


Домашнее задание:
  1. Знать теоретический и практический материал.

  2. Отвечать на контрольные вопросы.

  3. Знать термины.


Литература для самостоятельной подготовки: И.И.Миронова, Л.А.Романова, В.В.Долгов. Общеклинические исследования: моча, кал, ликвор, эякулят.- М.-Тверь: ООО "Издательство "Триада", 2005

Автор
Дата добавления 16.10.2016
Раздел Другое
Подраздел Другие методич. материалы
Просмотров32
Номер материала ДБ-265202
Получить свидетельство о публикации
Похожие материалы

Включите уведомления прямо сейчас и мы сразу сообщим Вам о важных новостях. Не волнуйтесь, мы будем отправлять только самое главное.
Специальное предложение
Вверх