Рабочие листы
к вашим урокам
Скачать
1 слайд
Регуляция экспрессии генов у бактерий
На уровне транскрипцииНа уровне трансляции
На уровне инициацииНа уровне элонгации или терминации
Позитивная (активация)Негативная (репрессия)
Белки – регуляторы:
активаторы,
репрессоры.
Сигналы, усиливающие экспрессию
(активация активатора или подавление репрессора): индукторы
Сигналы, ослабляющие экспрессию
(подавление активатора или активация репрессора): корепрессоры
2 слайд
Транскрипционная регуляция
В подавляющем большинстве случаев осуществляется белками, связывающимися с ДНК и что-то делающими с экспрессией гена/генов по соседству.
Самый часто встречающийся ДНК-связывающий мотив таких белков: спираль-поворот-спираль.
Аминоксилоты спирали 2 располагаются в большой бороздке ДНК и связываются с нуклеотидами ДНК сиквенс-специфическим образом. Спираль 1 во взаимодействии с нуклеотидами участия обычно не принимает, но ее наличие является обязательным для связывания спирали 2.
Участок связывания транскрипционного фактора в ДНК называется оператор.
3 слайд
Негативная регуляция инициации транскрипции
Lac-оперон
Сам термин «оперон» был впервые применен Жакобом и Мано именно к лактозному оперону. Оперон – совокупность генов, экспрессия которых на уровне транскрипции регулируется вместе и неразрывно.
Модель регуляции Lac-оперона Жакоба и Мано оказалась в принципе верной. Без лактозы ничто не мешает репрессору LacI связываться с оператором lacO и тем самым препятствовать связыванию РНК-полимеразы с промотором.
При наличии лактозы продукт ее метаболизма аллолактоза связывается с LacI и не дает ему связаться с lacO. РНК-полимераза начинает транскрипцию, синтезируются белки LacY, LacZ и LacА – ферменты, обеспечивающие метаболизм лактозы в полном объеме.
4 слайд
Операторы Lac-оперона
На самом деле операторов в лактозном опероне оказалось три штуки.
Белок LacI связывается с парой операторов (1 и 2 либо 1 и 3), формируя тетрамер. Это приводит к изгибу ДНК, который, в свою очередь, стабилизирует связывание LacI с ДНК.
В результате мы имеем крайне прочное связывание, разрушить которое, по сути, может только лактоза и ничто другое.
5 слайд
Негативная регуляция инициации транскрипции
Gal-оперон
Очень похожая история, но со специфическими чертами. Гены оперона могут транскрибироваться с двух промоторов, при этом белок САР в комплексе с цАМФ подавляет один промотор и активирует второй (зачем?). Однако же в отсутствие галактозы репрессор GalR связывается с двумя операторами и полностью блокирует транскрипцию. Если же галактоза появляется, GalR уже не может связываться с операторами, и транскрипция идет успешно.
6 слайд
Операторы Gal-оперона
Расстояние между двумя операторами 110 нуклеотидов. GalR работает в виде двух димеров, каждый из которых связывает по одному оператору. Это приводит к изгибу ДНК. Любопытно, что гистоноподобный белок HU для нормальной работы этой системы должен связаться в центре петли и сделать один лишний виток двойной спирали. Из-за этого у димеров GalR появляется возможность связать два оператора в антипараллельной конфигурации, что является обязательным условием репрессии.
Gal- и Lac-опероны кодируют белки, необходимые для утилизации соответствующих сахаров. Такие опероны называются деградационными. Логично, что они выключены в отсутствии этих сахаров.
7 слайд
Негативная регуляция инициации транскрипции
Trp-оперон
А здесь мы имеем дело с биосинтетическим опероном, кодирующим ферменты биосинтеза триптофана. При этом регуляция все равно негативная.
8 слайд
Негативная регуляция инициации транскрипции
Trp-оперон
Если триптофана нет в среде, значит, его надо синтезировать самой клетке. В этих условиях репрессор TrpR неактивен (т.н. апорепрессор), и идет транскрипция всех генов оперона, что приводит к синтезу триптофана.
Как только в среде появился триптофан, надо заканчивать его синтезировать, ведь это довольно энергозатратный процесс. Триптофан связывается с апорепрессором и активирует его, превращая уже в репрессор. Он связывается с оператором и блокирует ставшую ненужной транскрипцию.
9 слайд
Превращение апорепрессора в репрессор
Две молекулы триптофана связываются с димером TrpR и вызывают легкий поворот одной альфа-спирали относительно другой. Это приводит к формированию домена helix-turn-helix (НТН), компетентного в связывании большой бороздки ДНК в районе оператора.
10 слайд
Позитивная регуляция инициации транскрипции
Ara-оперон
Три гена метаболизма арабинозы находятся под промотором pBAD. Непосредственно перед промотором – оператор araI, с которым связывается белок AraC, чтобы активировать транскрипцию. Также имеются еще два оператора – araO1 и araO2, с которыми тот же белок AraC связывается, чтобы транскрипцию подавить. Ген araC транскрибируется в другую сторону, с промотора pC.
Репрессорная или активаторная активность белка AraC зависит от арабинозы. В ее присутствие димер AraC – это активатор (форма Р2), а в ее отсутствие – репрессор (форма Р1).
11 слайд
Позитивная регуляция инициации транскрипции
Ara-оперон
В отсутствие арабинозы Р1-форма AraC предпочтительно связывается с I1 – частью оператора araI и с оператором araО2. Оператор araI становится недоступен для Р2-формы araC, даже если она вдруг откуда-то возьмется. А без этого транскрипция с pBAD невозможна.
При появлении арабинозы Р1 превращается в Р2, а у этой формы AraC предпочительная аффинность к двум частям оператора araI. Это позволяет начаться транскрипции, синтезируются ферменты метаболизма арабинозы.
Ситуация, в которой наличествует избыток AraC – плохая ситуация, его может стать больше арабинозы, и начнется подавление транскрипции. В этом случае AraC начинает связываться с оператором araO1, что блокирует транскрипцию его собственного гена.
12 слайд
Регуляция ara-оперона зависит от поверхности спирали ДНК
Две молекулы AraC связываются с участками О2 и I1 с одной и той же стороны двойной спирали ДНК. Именно поэтому они способны изогнуть ДНК и провзаимодействовать друг с другом, а это является необходимым условием репрессии транскрипции, ибо стабилизирует ДНК-белковые комплексы.
Если из последовательности ДНК между двумя операторами удалить участок в 10 нуклеотидов (ровно 1 оборот спирали) – бактерия этого не почувствует.
А если удалить участок 5 нуклеотидов – никакой репрессии уже не будет, поскольку две молекулы репрессора окажутся на разных сторонах потенциального изгиба и не будут стабилизированы.
13 слайд
Позитивная регуляция инициации транскрипции
Mal-опероны
Активатор MalT, связываясь с мальтозой, начинает активировать сразу аж три оперона (4-й, 36-минутный, от этого белка независим, но тоже регулируется мальтозой).
14 слайд
Аттенюация транскрипции
Это такой способ регуляции, когда РНК-полимераза успешно инициирует транскрипцию, и этот этап регуляции не подвергается. А вот дальше РНК-полимераза может терминировать, даже не доехав до первого гена оперона. Часто это достигается модуляцией вторичной структуры синтезируемой РНК.
При аттенюации транскрипции часто бывает, что новосинтезируемая РНК в самом начале содержит последовательность, способную сложиться в шпильку. Если вы помните, то шпильки – это сигналы терминации транскрипции, каковая и происходит с образованием короткой РНК, ничего не кодирующей. Но если не дать сложиться такой терминационной шпильке, то все будет хорошо, и весь оперон нормально оттранскрибируется.
15 слайд
Аттенюация транскрипции
Часто аттенюация происходит с участием олигоU-участка в лидерной последовательности РНК. Полимераза проходит такие участки медленно, что позволяет сформироваться терминационной шпильке В-С. И все кончается преждевременной терминацией.
Однако же если что-то случилось, и формирование шпильки В-С запрещено, будет формироваться другая шпилька, А-В, не являющаяся терминационной, поскольку после нее нет олигоU-участка. И тогда транскрипция пойдет дальше и счастливо завершится в конце оперона.
16 слайд
Аттенюация транскрипции
Trp-оперон E.coli
Лидерный участок этого оперона содержит 4 важных участка. Первый из них – короткая открытая рамка считывания, содержащая, помимо прочих, два триптофановых кодона.
Участки могут формировать шпильки 1-2, 3-4 и 2-3. Последний вариант – единственный, при котором возможна нормальная транскрипция генов биосинтеза триптофана.
17 слайд
Аттенюация транскрипции
Trp-оперон E.coli: сопряжение транскрипции с трансляцией
РНК-полимераза застревает на шпильке 1-2 (так называемая шпилька паузы). Но тут ее догоняет рибосома, успешно инициировавшая на участке 1, и подталкивает ее. Неповоротливая РНК-полимераза сдвигается с места и едет транскрибировать дальше.
18 слайд
Аттенюация транскрипции
Trp-оперон E.coli: сопряжение транскрипции с трансляцией
В отсутствие триптофана, натурально, триптофановая тРНК не аминоацилирована и не может принести триптофан в трансляцию. А ведь в короткой ORF имеются два trp-кодона подряд! В этой ситуации рибосома застревает на этих кодонах, и выходит так, что свободные участки 2 и 3 находятся аккурат между рибосомой и РНК-полимеразой. Натурально, они формируют шпильку, и терминационная шпилька 3-4 сформироваться уже не может! РНК-полимераза успешно проходит лидерный участок, транскрибирует все гены триптофанового оперона, начинается синтез триптофана!
19 слайд
Аттенюация транскрипции
Trp-оперон E.coli: сопряжение транскрипции с трансляцией
Как только в клетке появляется триптофан, он тут же навешивается на свою родную тРНК. В этих условиях рибосома больше не застревает на триптофановых кодонах и успешно завершает синтез лидерного пептида. В этих условиях предпочтительным становится формирование терминационной шпильки 3-4, что приводит к терминации транскрипции и к остановке синтеза ферментов биосинтеза триптофана. А потом триптофан кончится, тРНК деацилируется, и все начнется сначала…
20 слайд
Аттенюация транскрипции
Trp-оперон B.subtilis
У этой бактерии аттенюация триптофанового оперона происходит совсем не так, но с тем же результатом. В лидерном участке оперона имеются 4 последовательности, способные формировать две шпильки (А-В, антитерминационная, и С-D, терминационная, поскольку после участка D идет олигоU).
Помимо этого, лидерный участок богат триплетами GAG, на которых все и завязано.
21 слайд
Аттенюация транскрипции
Trp-оперон B.subtilis: РНК-связывающий белок TRAP
В триптофан-связанной форме белок TRAP приобретает способность сильно связывать те самые триплеты. А поскольку сам белок склонен к формированию олигомеров шарообразной формы, то выходит так, что лидерная РНК «наматывается» на такие олигомеры и крепко-накрепко закрепляется триплетами. Однако в участках С и D таких триплетов нет, они свободны и могут сформировать шпильку, которая, как уже говорилось, является терминационной. Транскрипция оперона не идет, триптофан не синтезируется.
А если триптофана нет, TRAP не способен намотать на себя лидерную РНК. Тогда образуется более стабильная антитерминационная шпилька А-В, запрещающая формирование терминационной шпильки. Транскрипция оперона идет, триптофан синтезируется!
22 слайд
Аттенюация транскрипции
Trp-оперон B.subtilis: РНК-связывающий белок TRAP
На всякий случай TRAP в связанной с триптофаном форме еще и подавляет трансляцию РНК trpE, первой в опероне. Без этого белка в части РНК сразу перед SD trpE формируется большая шпилька, и при этом сам SD находится в оц виде, что делает возможной посадку рибосомы и трансляцию. Однако когда приходит Trp-TRAP, связывание с ним делает невозможным формирование такой шпильки, и формируется другая (менее стабильная), захватывающая SD. Трансляция в таких условиях невозможна!
23 слайд
«Аттенюация трансляции»
Бактериальная устойчивость к эритромицину
Эритромицин подавляет бактериальную трансляцию, связываясь с рибосомами и вызывая застревание в них полипептидов. Еще в сублетальных концентрациях он может сделать это в одном случае и вызывать застревание синтезируемого белка ErmCL. Это приводит к переорганизации шпилек в нижележащей части мРНК, в результате чего высвобождается SD следующей мРНК, ermC. Идет ее трансляция с образованием белка ErmC, метилтрансферазы, метилирующей один конкретный нуклеотид в рибосомной РНК, в результате чего эритромицин уже не может связаться с рибосомой!
24 слайд
Рибопереключатели
Структурные элементы РНК (чаще всего – в лидерном участке), способные разрешать или запрещать экспрессию нижележащих генов путем прямой реакции на какой-либо сигнал (наличие разнообразных химических молекул или даже просто изменение температуры), без дополнительных участников процесса (белковых факторов, рибосом…). И это тоже вариант аттенюации.
Вот, к примеру, регуляция транскрипции генов аминоацил-тРНК-синтетаз у B.subtilis. Лидерные участки РНК содержат шпильку, с которой очень хочется связаться соответствующей тРНК своим антикодоном. Если тРНК деацилирована, ее 3’-конец связывается с другой частью лидерной РНК, и такое взаимодействие приводит к формированию антитерминаторной шпильки. Транскрипция идет, фермент синтезируется. А если тРНК аминоацилирована, ее 3’-конец не может связаться с лидером, и формируется терминационная шпилька, что запрещает транскрипцию гена фермента.
25 слайд
Рибопереключатели
Метаболиты, влияющие на вторичную структуру лидера
Метаболитом может служить ион металла, аминокислота, витамин и много чего еще. Принцип нам уже знаком: в отсутствие метаболита формируется антитерминаторная шпилька, а в его присутствие – терминаторная. Это если метаболит надо синтезировать, а если его нужно, наоборот, запустить в метаболизм – роль метаболита в такой регуляции будет строго обратной.
26 слайд
Рибопереключатели
Регуляция инициации трансляции при помощи термосенсоров
Ген rpoH кодирует альтернативный сигма-фактор РНК полимеразы. Если он встраивается в холофермент вместо обычной сигмы, полимераза начинает узнавать другой набор промоторов и транскрибировать гены, кодирующие белки, критически важные для существования клетки при повышенной температуре.
Трансляция мРНК rpoH возможна как раз только при повышенной температуре, когда из-за этого расплетается шпилька, в состав которой входил SD этой мРНК.
Такие шпильки называются термосенсорами.
Рабочие листы
к вашим урокам
Скачать
6 667 830 материалов в базе
Настоящий материал опубликован пользователем Кузнецова Ирина Алексеевна. Инфоурок является информационным посредником и предоставляет пользователям возможность размещать на сайте методические материалы. Всю ответственность за опубликованные материалы, содержащиеся в них сведения, а также за соблюдение авторских прав несут пользователи, загрузившие материал на сайт
Если Вы считаете, что материал нарушает авторские права либо по каким-то другим причинам должен быть удален с сайта, Вы можете оставить жалобу на материал.
Удалить материалВаша скидка на курсы
40%Курс профессиональной переподготовки
500/1000 ч.
Курс профессиональной переподготовки
300/600 ч.
Курс профессиональной переподготовки
300/600 ч.
Курс повышения квалификации
72/180 ч.
Мини-курс
10 ч.
Оставьте свой комментарий
Авторизуйтесь, чтобы задавать вопросы.