Методическая разработка практического занятия ПМ.03 Проведение лабораторных биохимических исследований на тему "Определение концентрации сиаловых кислот в сыворотке крови "

Государственное автономное образовательное учреждение среднего профессионального образования Республики Крым

 «Евпаторийский медицинский колледж»

План занятия (практического) №36

Тема занятия: Определение концентрации сиаловых кислот  в сыворотке крови

Дисциплина (МДК)03.01 Теория и практика лабораторных биохимических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Курс: 1

Цели занятия:

Образовательные:

·               Изучить метод определения концентрации сиаловых кислот в сыворотке крови

·               Рассмотреть диагностическую роль определения сиаловых кислот в сыворотке крови

Развивающие:

·               Развивать умение анализировать и выделять главное в изучаемой проблеме;

·               Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений;

·               Формирование научного мировоззрения о роли биохимии в современном обществе;

Воспитательная:

·     воспитывать у студентов клиническое мышление;

·     прививать тягу к  фундаментальным наукам,

·     воспитывать интерес к выбранной профессии;

·     продолжить формирования здорового образа жизни

·     продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения

Междисциплинарные связи:

·анатомия и физиология человека,

·теория и практика лабораторных гистологических исследований,

·физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ,

·теория и практика лабораторных клинических исследований.

Внутридисциплинарные связи:

·клинико-диагностическое значения изучения обнаружения углеводов в сыворотке.

Место проведения: кабинет №410

Тип занятия: практическое

Количество часов: 4 академических

Обеспечение занятия методическая разработка.

Литература:

1.                 Пустовалова Л.М. Теория лабораторных биохимических исследований (практика) для медицинских колледжей. Феникс, 2019.

2.                 Камышникова В.С. Методы клинических лабораторных исследований. Москва. «МЕДпресс-информ», 2016

Интернет ресурсы:

1. МедУнивер-медицинский информационный портал для интересующихся. Биохимия. Meduniiver.com

Студент должен уметь:

-       готовить материал к биохимическим исследованиям;

-       определять биохимические показатели крови, мочи, ликвора и так далее;

-       работать на биохимических анализаторах;

-       вести учетно-отчетную документацию;

-       принимать, регистрировать, отбирать клинический материал;

Студент должен знать:

-       задачи, структуру, оборудование, правила работы и техники безопасности в биохимической лаборатории;

-       особенности подготовки пациента к биохимическим лабораторным исследованиям;

-       основные методы и диагностическое значение биохимических исследований крови, мочи, ликвора и так далее;

-       основы гомеостаза, биохимические механизмы сохранения гомеостаза;

-       нормальную физиологию обмена белков, углеводов, липидов, ферментов, гормонов, водно-минерального, кислотно-основного состояния; причины и виды патологии обменных процессов;

-       основные методы исследования обмена веществ, гормонального профиля, ферментов и другого.

     Общие компетенции:

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эф­фективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.

ОК 12. Оказывать первую медицинскую помощь при неотложных со­стояниях.

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

Профессиональные компетенции:

ПК 3.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных биохимических исследований.

ПК 3.2. Проводить лабораторные биохимические исследования биологических материалов; участвовать в контроле качества.

ПК 3.3. Регистрировать полученные результаты лабораторных биохимических исследований.

ПК 3.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

Структура занятия:

1.                 Организационный момент                                                                   3 мин.

2.                 Мотивация (цели) занятия                                                                   2 мин.

3.                 Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний)   30 мин.

4.                 Практическая часть                                                                          120 мин.

5.                 Итоговый контроль                                                                          15 мин

6.                 Задание на дом                                                                                      2 мин.

7.                 Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.             8 мин.

Ход занятия

1. Организационный момент. Приветствие, вступительное слово преподавателя. Проверка присутствующих, внешнего вида студентов, готовности студентов к лекции.

2.   Цели (мотивация) занятия.  Изучение методов определения концентрации сиаловых кислот в сыворотке крови является необходимым элементом освоения программы профессионального модуля ПМ.03.

3.   Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний):

а) проверка знаний: вопросы к устному фронтальному опросу (Приложения 1)

б) проверка внеаудиторной самостоятельной работы: проверка домашнего задания, устное обсуждение.

в) подведение итогов контроля: оценка исходных знаний

4.   Практическая часть:

а) подготовка студентов к самостоятельной работе (проведение инструктажа по выполнению заданий). Демонстрация практических умений и навыков преподавателем; разбор алгоритмов действия практических навыков, рекомендации по выполнению (Приложение 2).

б) самостоятельная работа студентов: Задания студентам для выполнения практической работы  

·     Выполнить определение концентрации сиаловых кислот в данной сыворотке крови;

·      Оформить данные в тетрадях.

в) подведение итогов самостоятельной работы.

·        Выводы о проделанной работе. 

5.   Итоговый контроль. 

·        Решение ситуационных задач (Приложение 3).

·        Проверка преподавателем дневников студентов

6.   Задание на дом.

 Подготовить тему «Определение гаптоглобина в сыворотке крови».

7.   Подведение итогов занятия, оценка работы студентов. Преподаватель оценивает работу студентов, разъясняет ошибки; отвечает на вопросы студентов.

Преподаватель    Л.С. Гарибова,

                                к.б.н.

                                                                                          Приложение №1

1.     Перечислите основные факторы , регулирующие обмен углеводов.

2.     Как влияет инсулин на обмен глюкозы?

3.     Как действуют на обмен глюкозы адреналин и глюкагон?

4.     Что является предшественником сиаловых кислот?

5.     В составе каких клеток встречаются сиаловые кислоты?

6.     Какую роль играют сиаловые кислоты в организме человека?

7.     Какой фермент принимает участие в синтезе сиаловых кислот?

8.     Какое участие принимает печень в обмене углеводов?

                                                                                              Приложение №2

Сиаловые кислоты представляют собой N-ацетил- и N-глицилпроизводные нейраминовой кислоты. Эти соединения рассматриваются как нормальные компоненты всех тканей и биологических жидкостей организма человека и животных и являются важной составной частью углевод-белковых (гликопротеинов) и углевод-липидных (гликолипидов) комплексов, в которых занимают обычно краевое положение. После отщепления от гликопротеидов свободные сиаловые кислоты инактивируют многие бактериальные и вирусные болезнетворные агенты. Поэтому увеличение содержания в крови сиалогликопротеинов может быть проявлением компенсаторной, защитной воспалительной реакции. В свободном виде производные нейраминовой кислоты присутствуют в крови, слизистой оболочке желудка, щитовидной железе и др.

Для определения концентрации сиаловых кислот в сыворотке крови обычно используется колориметрический метод Гесса. При этом безбелковый фильтрат сыворотки крови подвергают гидролизу, в результате чего из состава сиалогликопротеидов выделяются сиаловые кислоты, которые взаимодействуя с уксусной и серной кислотами в условиях повышенной температуры, создаваемой в кипящей водяной бане, дают окрашенные соединения, изменяющие цвет раствора в буровато-розовый или красно-фиолетовый. При этом интенсивность окрашивания зависит от концентрации сиаловых кислот.

Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 1 мл сыворотки крови и, осторожно встряхивая, добавляют 1 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты. Пробирку помещают на 5 минут в кипящую водяную баню, затем охлаждают обычно путем выдерживания ее в течение 5 минут в ледяной бане или холодной воде, центрифугируют 5 минут при 1000-2000 об/мин. К 0,4 мл отобранной надосадочной жидкости добавляют 5 мл уксусно-сернокислой смеси и пробы повторно нагревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут. При этом бесцветный раствор постепенно приобретает красно-фиолетовый цвет. После охлаждения в ледяной бане или под струей холодной воды пробы колориметрируют на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете с шириной слоя 10 мм. В качестве контроля используют 5% раствор серной кислоты в ледяной уксусной кислоте.

Результат выражают либо в условных единицах (при отсутствии стандартного раствора), для чего полученную величину экстинкции умножают на 1000, либо в значениях концентрации ацетилнейраминовой кислоты. В последнем случае расчет ведут по калибровочному графику.

  Построение калибровочного графика. Из основного стандартного раствора N-ацетилнейраминовой кислоты готовят рабочие растворы. К растворам прибавляют 5 мл уксусно-сернокислого реактива и обрабатывают их так же, как опытные пробы

В норме содержание сиаловых кислот составляет 135-200 усл.ед., или 62-73 мг% (0,62-0,73 г/л), или 2,00-2,36 ммоль/л N-ацетилнейраминовой кислоты.

Клинико-диагностическое значение

При инфекционных, аллергических состояниях и некробиотических процессах нарушается тканевой метаболизм с деполимеризацией гликопротеиновых комплексов. В результате этих изменений в сыворотке крови в большом количестве появляются продукты расщепления белково-углеводных комплексов и в связи с этим резко нарастает доля сиаловых кислот.

Гиперсиалемия (повышение уровня сиаловых кислот в сыворотке крови) наблюдается при опухолях головного мозга, инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе, раке, эндокардите, лейкемии, лимфогранулематозе, нефротическом синдроме, остеомиелите и других заболеваниях (преимущественно воспалительного характера, а также сопровождающихся распадом соединительной ткани). У больных с активным туберкулезом содержание нейраминовых кислот нередко составляет 5,74 ммоль/л, с подострым бактериальным эндокардитом – 3,3 ммоль/л, с далеко зашедшей раковой опухолью – 4,58 ммоль/л. Их концентрация возрастает также при заболеваниях, связанных с поражением паренхимы печени и коллагенозах. Гипосиалемия или снижение доли сиаловых кислот в крови отмечается при пернициозной анемии, гемохроматозе, болезни Вильсона-Коновалова и дегенеративных процессах в центральной нервной системе, что, видимо, связано с нарушением биосинтеза гликопротеиновых комплексов. 

Приложение №3

Ситуационные задачи

     Задача №1:

 Утром в лабораторию из стационара поступила кровь больного с подозрением на сахарный диабет для определения содержания глюкозы, взятая накануне вечером.

Вопрос:

1. Достоверен ли будет результат анализа? Дать обоснование. Как подготовить пациента к исследованию?

2. Какие требования предъявляются к сыворотке для определения глюкозы?

             Задача №2:

В биохимическую лабораторию доставлена сыворотка крови больного с диагнозом: «Сахарный диабет» для определения содержания глюкозы.

Вопрос:

1. Допускается ли гемолиз сыворотки при определении концентрации глюкозы?

2. В каких биологических жидкостях определяют концентрацию глюкозы? Назовите методы определения глюкозы в биологических жидкостях.