Методическая разработка практического занятия ПМ.03 Проведение лабораторных биохимических исследований на тему "Определение протромбинового времени "

Государственное автономное образовательное учреждение среднего профессионального образования Республики Крым

«Евпаторийский медицинский колледж»

План занятия (практического) №57

Тема занятия: Определение протромбинового времени

Дисциплина (МДК) 03.01 Теория и практика лабораторных биохимических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Курс: 3

Цели занятия:

Образовательные:

• Изучить методы определения протромбинового времени плазмы

• Рассмотреть диагностическую роль определения протромбинового времени плазмы крови

Развивающие:

• Развивать умение анализировать и выделять главное в изучаемой проблеме;

• Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений;

• Формирование научного мировоззрения о роли биохимии в современном обществе;

Воспитательная:

• воспитывать у студентов клиническое мышление;

• прививать тягу к фундаментальным наукам,

• воспитывать интерес к выбранной профессии;

• продолжить формирования здорового образа жизни

• продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения

Междисциплинарные связи:

• анатомия и физиология человека,

• теория и практика лабораторных гистологических исследований,

• физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ,

• теория и практика лабораторных гемотологических исследований.

Внутридисциплинарные связи: Показатели протромбинового индекса в организме человека в норме и патологии.

Место проведения: лаборатория №410

Тип занятия: практическое

Количество часов: 4

Обеспечение занятия: методическая разработка

Литература:

Основные источники:

1. Пустовалова Л.М. Теория лабораторных биохимических исследований (практика) для медицинских колледжей. Феникс, 2019.

2. Камышникова В.С. Методы клинических лабораторных исследований. Москва. «МЕДпресс-информ», 2016

Интернет ресурсы:

1. МедУнивер-медицинский информационный портал для интересующихся. Биохимия. Meduniiver.com

Студент должен уметь:

• готовить материал к биохимическим исследованиям;

• определять биохимические показатели крови;

• работать на биохимических анализаторах;

• вести учетно-отчетную документацию;

• принимать, регистрировать, отбирать клинический материал;

Студент должен знать:

• задачи, структуру, оборудование, правила работы и техники безопасности в биохимической лаборатории;

• основные методы и диагностическое значение биохимических исследований крови, мочи, ликвора и так далее;

• особенности подготовки пациента к биохимическим лабораторным исследованиям; основные методы и диагностическое значение биохимических исследований крови, мочи, ликвора и так далее;

• нормальную физиологию обмена водно-минерального, кислотно-основного состояния; причины и виды патологии обменных процессов;

• особенности подготовки пациента к биохимическим лабораторным исследованиям;

• основы гомеостаза, биохимические механизмы сохранения гомеостаза.

Общие компетенции:

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эф­фективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.

ОК 12. Оказывать первую медицинскую помощь при неотложных со­стояниях.

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

Профессиональные компетенции:

ПК 3.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных биохимических исследований.

ПК 3.2. Проводить лабораторные биохимические исследования биологических материалов; участвовать в контроле качества.

ПК 3.3. Регистрировать полученные результаты лабораторных биохимических исследований.

ПК 3.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

Структура занятия:

1. Организационный момент 3 мин.

2. Мотивация (цели) занятия 2 мин.

3. Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 30 мин.

4. Практическая часть 120 мин.

5. Итоговый контроль 15 мин

6. Задание на дом 2 мин.

7. Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.

Ход занятия

1. Организационный момент. Приветствие, проверка присутствующих, внешнего вида студентов, сообщение темы, учебных целей занятия

2. Цели (мотивация) занятия. Изучение методов определения протромбинового времени плазмы крови является необходимым элементом освоения программы профессионального модуля ПМ.03.

3. Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний):

а) проверка знаний: вопросы к устному фронтальному опросу (Приложения 1)

б) проверка внеаудиторной самостоятельной работы: проверка домашнего задания, доклад по заданной теме, устное обсуждение.

в) подведение итогов контроля: оценивание, замечания по работе.

4. Практическая часть:

а) подготовка студентов к самостоятельной работе (проведение инструктажа по выполнению заданий). Демонстрация практических умений и навыков преподавателем; разбор алгоритмов действия практических навыков, рекомендации по выполнению (алгоритм выполнения практического задания в приложении2).

б) самостоятельная работа студентов: Задания студентам для выполнения практической работы (алгоритмы определения в приложении 2)

• Выполнить определение концентрации протпромбинового времени в данной плазме крови;

• Оформить данные в тетрадях.

в) подведение итогов самостоятельной работы. Выборочный индивидуальный контроль практических навыков.

5. Итоговый контроль.

• Решение ситуационных задач (Приложение 3).

• Проверка преподавателем дневников студентов

5. Задание на дом:

Подготовить тему «Определение концентрации фибриногена в плазме крови методом Рутберг»

5. Подведение итогов занятия, оценка работы студентов. Преподаватель оценивает работу студентов, разъясняет ошибки; отвечает на вопросы студентов.

Преподаватель Л.С. Гарибова,

к.б.н.

Приложение №1

Вопросы к устному фронтальному опросу:

1. Что означает понятие «гемостаз»?

2. Какими функционально- структурными компонентами обеспечивается гемостаз?

3. Связь гемостаза с другими системами организма.

4. Кто положил начало изучению гемостаза?

5. Из каких этапов состоит процесс кровотечения?

6. Что такое фибрин?

7. Роль фибрина при воспалении?

8. Протромбин –это…?

9. Что отражает протромбиновое время?

10. Что отражает протромбиновый индекс?

11. Норма протромбинового индекса? Протромбинового времени?

12. Повышенный протромбин симптом каких заболеваний?

13. Пониженный протромбин симптом каких заболеваний?

Эталон ответа:

1. Физиологичная система, которая обеспечивает поддержку крови в жидком состоянии и предупреждает кровопотери, - называется системой гемостаза.

2. Гемостаз обеспечивается тремя функционально-структурными компонентами:

1. Стенка кровеносных сосудов.

2. Клетки крови, в основном, тромбоциты.

3. Ферментные и неферментные системы плазмы.

3. Функционирование системы гемостаза зависит от многих факторов, и прежде всего, от тромбоцитов (как от их количества, так и от функционального состояния), достаточного уровня факторов свертывания, ионов кальция, витамина К и др.. Это, в свою очередь, обеспечивается нормальной функцией печени, селезенки, костного мозга, а также других органов и систем организма.

4. Создание первой научной теории свертывания крови в 1872 г. принадлежит А.А. Шмидту. Первоначально она сводилась к следующему: свертывание крови – ферментативный процесс; для свертывания крови необходимо присутствие трех веществ: фибриногена, фибринопластического вещества и тромбина.

5. Процесс остановки кровотечения достаточно сложный и проходит в 2 этапа. В соответствии с этим различают гемостаз:

Сосудисто-тромбоцитарный или первичный (временный),

Коагуляционный или вторичный (окончательный)

6. Фибрин – это нерастворимый протеин, вырабатывающийся в организме в качестве ответной реакции на кровотечение. Этот белок является твердым элементом, состоящим из волокнистых нитей. Прародителем фибрина является фибриноген. Это белок, вырабатываемый печенью.

7. Выработка фибрина и воспаление – это два тесно связанных процесса. Белок играет важную роль при контакте с разрушающейся, поврежденной тканью. Освободившаяся из ткани тромбокиназа вступает в контакт с фибриногеном. При свертывании крови все токсические вещества оказываются закупоренными в сгустке. Эта особенность воздействия белка при воспалительном процессе защищает организм от дальнейшего распространения токсинов и их негативного воздействия. Подобная реакция получила название фиксации. Таким образом, фибрин – это еще и защитник организма от токсинов.

8. Протромбин - сложный белок, один из важнейших показателей коагулограммы, характеризующий состояние свертывающей системы крови. Протромбин или фактор II свертывания крови — это предшественник тромбина (белка, стимулирующего образование тромба). Протромбин синтезируется в печени при участии витамина К. На основании анализа протромбинов врач может оценить работу и выявить заболевания печени и желудочно-кишечного тракта. Для характеристики системы гемостаза (свертывающей системы крови) анализ протромбинов крови является наиболее важным тестом, входящим в гемостазиограмму.

9. Протромбиновое время отражает время свертывания плазмы крови, выражается в секундах.

10. Протромбиновый индекс (или индекс протромбина). Определение индекса протромбина выражает отношение протромбинового времени здорового человека к протромбиновому времени больного. Выражается в процентах.

11. Норма протромбинового индекса: 78-142%. Протромбинового времени: 12—20 с (в зависимости от активности тромбопластина.

12. Повышенный протромбин — симптом следующих заболеваний:

• тромбоэмболия

• инфаркт миокарда, предынфарктное состояние

• полицитемия

• злокачественные опухоли

13. Низкий протромбин в крови дает врачу основание поставить следующий диагноз:

• врожденный или приобретенный дефицит протромбина

• нехватка витамина К.

Приложение №2

Определение протромбинового теста (ПТ) является одним из наиболее часто выполняемых коагулологических анализов, ПТ имитирует внешний путь свертывания крови, когда из тканей при повреждении выделяется так называемый тканевой фактор (ТФ), липопротеин, который в обычных условиях связан с клеточной мембраной. ТФ при попадании в кровоток связывается (образует комплекс) с циркулирующим постоянно в крови фактором VII, этот комплекс активирует фактор X, который вместе с фактором V, фосфолипидами в присутствии ионов кальция превращает неактивный протромбин плазмы крови (фактор II) -в активный фермент тромбин, образующий фибриновый сгусток из растворимого плазменного белка фибриногена (фактор I).

Определение протромбинового времени и протромбинового индекса

Унифицированный метод определения протромбинового времени плазмы

Принцип. Определяют время свертывания плазмы при добавлении тромбопластина и хлорида кальция.

Реактивы:

1. 3,8 % раствор цитрата натрия или 1,34 % раствор оксалата натрия .

2. 0,025 моль/л раствор хлорида кальция

3. 1 % суспензия тромбопластина.

При недостаточно активном тромбопластине (удлиненное протромбиновое время плазмы крови донора) используют 2 % суспензию.

Оборудование.

1. Водяная баня на 37 °С.

2. Секундомеры.

Материал для исследования:

Бестромбоцитарная плазма.

Ход определения:

В пробирку наливают 0,1 мл плазмы донора и 0,1 мл раствора тромбопластина и ставят пробирку в водяную баню. Через 1 мин туда же добавляют 0,1 мл раствора хлорида кальция, немедленно включают секундомер и отмечают время образования сгустка. Исследование повторяют и вычисляют средний результат. Точно так же определяют время свертывания исследуемой плазмы.

Нормальные величины: 12—20 с (в зависимости от активности тромбопластина)!

Клиническое значение. Удлинение протромбинового времени наблюдается при врожденной или приобретенной недостаточности факторов, отражающих функционирование внешнего механизма образования протромбиназы, ее действие на протромбин и последующее образование фибрина (факторов X, VII, V, II, I). Обычно оно отмечается у больных, принимающих оральные антикоагулянты (неодикумарин, фенилин, синкумар, омефин), при тяжелых поражениях паренхимы печени и недостаточности витамина К (механическая желтуха, нарушения всасывания в кишечнике, кишечный дисбактериоз). Терапия непрямыми антикоагулянтами считается адекватной, если протромбиновое время увеличивается примерно в 2 раза.

Примечания. 1. Нередко применяется вариант, отличающийся тем, что растворы тромбопластина и хлорида кальция предварительно смешивают в соотношении 1: I и к 0,1 мл плазмы добавляют 0,2 мл тромбопластин-кальциевой смеси. 2. При лечении оральными антикоагулянтами уменьшается активность не только факторов X, VII и II, отражающаяся на протромбиновом времени, но и фактора IX, недостаточность которого не влияет на протромбиновое время. В связи с этим контроль за лечением антивитаминами К осуществляется путем сочетанного определения протромбинового времени и АЧТВ, чувствительного к дефициту фактора IX. 3. Часто результаты исследования выдают в виде протромбинового индекса, который представляет собой выраженное в процентах отношение протромбинового времени нормальной плазмы к протромбиновому времени исследуемой плазмы. У здоровых людей он колеблется в пределах 95—105 %. Уменьшение протромбинового индекса имеет такое же значение, как удлинение протромбинового времени.

Унифицированный метод определения протромбинового времени разведенной плазмы.

Принцип тот же.

Реактивы те же и дополнительно 0,85 % раствор хлорида натрия.

Оборудование то же.

Материал для исследования. Бестромбоцитарная исследуемая и донорская плазма.

Ход определения.

Донорскую плазму разводят 0,85 % раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 1. В пробирку набирают 0,2 мл раствора хлорида кальция, добавляют 0,1 мл суспензии тромбопластина и ставят в водяную баню. Через 30 с вводят туда же 0,1 мл разведенной плазмы, немедленно включают секундомер и отмечают время образования сгустка. Исследование повторяют и берут средний результат. Точно так же определяют протромбиновое время исследуемой плазмы.

Нормальные величины примерно те же, колеблются в зависимости от активности тромбопластина.

Клиническое значение то же.

Унифицированный метод определения протромбинового времени капиллярной крови

Принцип. Определяют время свертывания нитратной капиллярной крови при добавлении суспензии тромбопластина и раствора хлорида кальция.

Реактивы.

1. 3,8 % раствор цитрата натрия (см. 4.1).

2. 0,5 % раствор хлорида кальция.

3. 1 % или 2 % суспензия тромбопластина.

Оборудование.

1. Водяная баня на 37 °С.

2. Секундомеры.

3. Скарификаторы.

4. Микропипетки вместимостью 0,1 мл.

Материал для исследования. Цитратная исследуемая и донорская кровь.

Ход определения. В микропипетку набирают 0,02 мл раствора цитрата натрия. Мякоть пальца донора протирают спиртом и после его высыхания делают прокол стерильным скарификатором. Набирают в ту же микропипетку 0,08 мл свободно выступающей крови, немедленно выдувают содержимое в пробирку и перемешивают кровь с антикоагулянтом. Точно так же набирают нитратную кровь еще в две пробирки. Каждую пробирку устанавливают последовательно в водяную баню и через 1 мин добавляют 0,1 мл суспензии тромбопластина и 0,1 мл раствора хлорида кальция. В момент добавления последнего реактива включают секундомер и отмечают время образования сгустка. Вычисляют средний результат. Точно так же берут цитратную кровь у обследуемого лица и определяют ее протромбиновое время.

Нормальные величины примерно те же, колеблются в зависимости от активности тромбопластина.

Клиническое значение то же

Приложение №3

Ситуационные задачи:

А. Протромбиновое время (ПВ) исследуемой плазмы больного И., принимающего антикоагулянтную терапию – 30 секунд, протромбиновое время контрольной плазмы – 12 секунд. Международный индекс чувствительности тромбопластина (МИЧ) – 1,1.

Вопрос:

1. Объясните, какими единицами можно выражать результаты исследования факторов протромбинового комплекса.

2. Поясните, какую плазму (богатую или бедную тромбоцитами) используют для проведения этого теста.

Б) В лабораторию для исследования системы гемостаза доставили кровь, стабилизированную гепарином. С гепаринизированой плазмой определяли фибриноген, протромбиновое время, каолиновое время, кефалиновое время, активированное частичное тромбопластиновое время. Ни один анализ не получился. Лаборант переделал все реактивы, но сгустки фибрина так и не образовывались.

Вопрос:

1. Расскажите алгоритм получения плазмы бедной и богатой тромбоцитами.

2. Назовите антикоагулянт, применяющийся для исследования системы гемостаза, и поясните, в каком объёмном соотношении берут кровь и антикоагулянт для исследования.

3. Объясните, на чём основан принцип действия этих антикоагулянтов.

4. Расскажите принцип определения факторов протромбинового комплекса, и в каких единицах это определение может выражаться.