Занятие
№5.
Тема:
«Определение кетоновых тел в моче»
Цель:
Изучить исследование химических свойств мочи.
Задачи:
1. Изучить
полуколичественные и качественные методы определения кетоновых тел в моче;
2. Изучить
основные принципы работы с диагностическими тест-полосками
Тип
занятия: практическое (6ч)
Планируемые
результаты:
Студент
должен знать:
1. Причины
появления кетоновых тел в моче;
2. Методы
диагностики кетоновых тел в моче;
3. Клинико-диагностическое
значение исследования показателей.
Студент
должен уметь:
1. Подготовить
рабочее место к исследованию мочи.
2. Приготовить
реактивы, посуду и оборудование к исследованию.
3. Определять
химические свойства мочи (кетоновые тела в моче качественными и полуколичественными
методами).
4. Работать с
бланочной продукцией (оформление бланков анализа).
5. Правильно
интерпретировать полученные результаты исследования.
Средства достижения
поставленной цели:
1. Работа с конспектами,
учебной и специальной литературой.
2. Подготовка к
практическим занятиям с использованием методических рекомендаций преподавателя,
выполнение и оформление практических работ.
3. Работа с
информационными средствами обучения на электронных и бумажных носителях.
4. Демонстрация
качественной реакции определения кетоновых тел в моче (Лестраде, Ланге).
Оборудование учебного кабинета и рабочих мест
кабинета:
Ø
посадочные
места по количеству обучающихся;
Ø
рабочее
место преподавателя;
Ø
специализированная
мебель и оборудование.
Технические средства обучения:
Ø
компьютеры
для оснащения рабочего места преподавателя и обучающихся;
Ø
технические
устройства для аудиовизуального отображения информации;
Ø
аудиовизуальные
средства обучения (презентация, учебный видеосюжет).
Результатом освоения урока является:
Формирование практических профессиональных умений и
первоначального практического опыта, в том числе
профессиональными (ПК) и общими (ОК) компетенциями:
ПК 1.1. Готовить рабочее
место для проведения лабораторных общеклинических исследований.
ПК 1.2. Проводить лабораторные
общеклинические исследования биологических материалов.
ПК 1.3. Регистрировать
результаты проведенных исследований.
ПК 1.4. Проводить утилизацию
отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной
посуды, инструментария, средств защиты.
ОК 1. Понимать сущность и
социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый
интерес.
ОК 2. Организовывать
собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения
профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.
ОК 6. Работать в коллективе и
команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.
ОК 9. Ориентироваться в
условиях смены технологий в профессиональной деятельности.
ОК 13.Организовывать рабочее
место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии,
инфекционной и противопожарной безопасности.
IМодуль.
Теоретическая часть с элементами
самостоятельной работы
Задание №1.
Изучите и законспектируйте учебный материал в рабочие тетради.
Обнаружение кетоновых тел в общем анализе мочи называют -
кетонурия. В
норме кетоновые тела в моче не обнаруживаются, так как ежедневно выводятся из
организма органами выделения, в количестве 25-50 мг в сутки. К таким телам
относятся ацетон, уксусная и бета-осмолярная кислоты. Кетоновые тела в моче
встречаются совместно, поэтому раздельное определение их клинического значения
не имеет. В моче здорового человека медики не выявляют кетоновых тел.
Причины появления кетоновых тел
К
причинам накапливания в моче кетоновых тел относятся многие причины, некоторые
из них несут угрозу нормальной жизнедеятельности организма. Вот одни из причин:
- длительное
голодание организма;
- общее
переохлаждение;
- физические
перегрузки;
- беременность;
- чрезмерное
употребление белков с пищей;
- грипп;
- анемия;
- рак
и другие заболевания.
Если
кетонурия спровоцирована сахарным диабетом, то наличие кетоновых тел в моче
является своеобразным сигналом для организма о том, что нужно пересмотреть свой
рацион питания.
Часто
такая патология встречается, если нарушен баланс между употребляемыми жирами и
углеводами. Если кетонурия сопровождается сильно выраженным плодовым запахом
мочи (чаще яблочным), то это говорит о высоком содержании глюкозы в моче при
сахарном диабете.
При
обнаружении кетоновых тел в моче при сахарном диабете, медики говорят о
переходе заболевания в более тяжелую стадию. Очень большое содержание в моче
ацетона и уксусной кислоты при сахарном диабете, свидетельствует о приближении
состояния гипергликемической комы у больного.
Если
при исследовании анализа мочи больного, в ней обнаружен только ацетон без
содержания глюкозы, то речь идёт о другом заболевании, не имеющем отношения к
диабету.
Отсутствие глюкозурии при наличии
кетонурии исключает диабет. При диабетической кетонурии мочу
исследуют каждые 4 часа и, в зависимости от результатов анализа, корректируют
дозу инсулина. Ликвидировать кетонурию необходимо в течение 1-2 суток.
У детей кетонурия может
быть при различных заболеваниях ввиду лабильности углеводного обмена. Поэтому
даже незначительные погрешности в диете, в особенности при наличии острой
инфекции, нервного возбуждения, переутомления и т. п. могут привести к кетозу.
Кетонурия в раннем детском возрасте может наблюдаться при токсикозах,
длительных желудочно-кишечных расстройствах, дизентерии и других заболеваниях.
У новорожденных повышение кетонов в моче почти всегда вызывается
недокормленностью.
Как образуются кетоновые тела?
Чаще
всего кетоновые тела образуются при нарушении обменных процессов белков, жиров
и углеводов в организме человека. После перенесенного хирургического
вмешательства, кетонурия встречается из-за распада белка, вследствие операционной
раны. Наряду с ростом кетоновых тел в моче, наблюдается увеличение кетогенеза в
тканях организма и накопление ацетона и уксусной
кислоты в крови, что носит название кетонемия.
Методы диагностики кетоновых тел
Кетонурия
диагностируется как в условиях стационара, так и дома. Для того чтобы
определить наличие ацетона в моче в домашних условиях, используют специальные
тест-полоски, которые продаются в аптеке. Например, «Ацетон тест», «Кетостикс»,
«Кетур-Тест», «КетоглюкоФАН».
Тест-полоски
для домашнего определения в моче ацетона, могут давать ложноположительный
результат. Это наблюдается в тех случаях, когда больной принимает каптоприл или
лекарственные средства, с содержанием в них фталеина.
Существует
ещё один способ определения кетоновых тел в моче. Для этого можно добавить в
емкость с мочой несколько капель 5% раствора нитропруссида или раствора
нашатырного спирта. Если кетоновые тела присутствуют в моче, то она окрасится в
ярко-красный цвет.
Существует ещё одна разновидность кетонурии - лейциноз,
или врождённое заболевание, передающееся по наследству.
Другое название этой патологии – разветвленноцепочечная
кетонурия. Встречается у новорожденных детей, в соотношении
1/120000-300000 случаев.
Лейциноз,
вызван нарушением обменных процессов, очень тяжело протекает и заканчивается
смертельным исходом. У таких больных параллельно присутствуют и симптомы
расстройства центральной нервной системы, нарушение развития, пониженное
содержание глюкозы в крови, пониженный тонус мышц, а также может развиться
летаргическое состояние. Моча больного лейцинозом имеет ярко выраженный запах
кленового сиропа.
IIМодуль. Самостоятельная работа с исследовательским этапом
Методические установки:
ü
Изучите и законспектируйте качественные и
количественные методы определения кетоновых тел в моче;
ü Разбейтесь
на группы по 2-3 человека и получите образцы биологической жидкости (мочи) у
преподавателя, пронумеруйте образцы;
ü Проведите
исследование мочи с помощью диагностических тест-полосок;
ü Оцените
полученный результат (норма, патология).
ü Результат
запишите в бланки анализа, сдайте их преподавателю.
К методам определения кетоновых тел в моче относятся:
1гр.:
качественные методы (пробы)
- Проба Ланге
- Модифицированная проба Ротеры
- Проба Легаля
- Проба Лестраде
2 гр.:
полуколичественные методы
- Экспресс-тесты
(диагностические тест-полоски)
Принцип обнаружения кетоновых тел в моче. Нитропруссид натрия
в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами, образуя комплекс, окрашенный в
розовато-сиреневый, сиреневый или фиолетовый цвет. Чувствительность проб около
50 мг/л кетоновых тел. Полуколичественную оценку результатов можно дать в
интервале от 150 до 1500 мг/л.
Задание №1.
Определение
кетоновых тел в моче с помощью пробы Ланге.
|
Принцип метода:Нитропруссид натрия в щелочной среде
реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса красно-фиолетового
цвета.
|
Посуда,
реактивы, оборудование:
|
-
Химическая
пробирка;
-
Секундомер
(часы);
-
Реактивы:
- Уксусная
кислота 80%.
- Нитропруссид
натрия (свежеприготовленный 10% раствор).
- Аммиак.
|
Ход исследования:
|
К 12 – 15 мл мочи приливают около 1 мл уксусной кислоты и
около 0,5 мл раствора нитропруссида натрия. Затем наслаивают аммиак.
|
Интерпретация
полученных результатов:
|
В положительном случае на границе двух жидкостей
образуется фиолетовое кольцо. Кольцо может появиться не сразу, а в течение 2
– 3 мин.
Другая модификация этой пробы
удобна тем, что можно использовать готовый реактив нитропруссида натрия.
|
Приготовление реактива:
|
6 г нитропруссида натрия растворяют в
100 мл 30% уксусной кислоты.
|
Ход исследования:
Интерпретация
полученных результатов:
|
К 5 – 6 мл мочи прибавляют
несколько капель реактива (до цвета чая) и наслаивают аммиак.
В положительном случае на границе
жидкостей появляется фиолетовое кольцо.
|
Зарисуйте
схему пробы Ланге
|
Задание №2.
Определение
кетоновых тел в моче с помощью модифицированной пробы Ротеры.
|
Принцип
метода:интенсивность
окраски рабочего раствора позволяет ориентировочно судить о концентрации
кетоновых тел в моче.
|
Посуда,
реактивы, оборудование:
|
-
Химическая
пробирка;
-
Секундомер;
-
Реактивы:
- Нитропруссид
натрия, раствор 50 г/л; готовят перед использованием.
- Аммония
сульфат.
- Аммиак
водный – 25% раствор.
|
Ход исследования:
|
Приблизительно 200 мг сухого сульфата аммония, 5 капель
мочи и 2 капли раствора нитропруссида натрия тщательно смешивают в пробирке,
а затем на эту смесь тщательно наслаивают 10 – 15 капель раствора водного
аммиака.
|
Интерпретация
полученных результатов:
|
При наличии кетоновых тел на
границе раздела в течение 3 – 5 мин образуется красно-фиолетовое кольцо,
интенсивность окраски которого позволяет ориентировочно судить о концентрации
кетоновых тел в моче (см. таблицу).
|
При незначительной концентрации
кетоновых тел слабое кольцо может появиться на 8 – 10 минуте.
|
Ориентировочная
количественная оценка кетоновых тел в моче.
|
Интенсивность окраски
|
Обнаруживаемые
вещества, г/л Ацетоуксусная кислота
|
Следы
|
0,05
|
Умеренная
|
0,3
|
Интенсивная
|
0,8
|
Задание №3.
Определение
кетоновых тел в моче с помощью пробы Легаля.
|
Принцип метода: нитропруссид
натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса
слабо-розового или красного цвета.
|
Посуда,
реактивы, оборудование:
|
-
Химическая пробирка;
-
Реактивы:
- Свежеприготовленный
5% водный раствор нитропруссида натрия.
- 10
– 15% раствор едкого натрия.
- Уксусная
кислота ледяная.
|
Ход исследования:
|
К 5 – 6 мл мочи прибавляют несколько капель реактива № 1
и 0,5 мл реактива № 2. Получается красное окрашивание. Добавляют 0,5 – 1 мл
реактива № 3.
|
Интерпретация
полученных результатов:
|
Если красный цвет исчезает, проба
отрицательная, если сохраняется – положительная. Если получается
слабо-розовая окраска, то проба считается также положительной.
|
Задание №4.
Определение
кетоновых тел в моче с помощью пробы Лестраде.
|
Принцип метода: определение кетоновых тел в моче с помощью сухого реактива (или
таблеток).
|
Посуда,
реактивы, оборудование:
|
-
Предметное стекло;
-
Фильтровальная бумага;
-
Реактив;
-
Секундомер (часы).
|
Приготовление сухого реактива:
|
нитропруссида натрия 1 г,
сульфата аммония 20 г, карбоната натрия безводного 20 г. Отвешенные реактивы
тщательно растирают в ступке до получения мелкого однородного порошка.
Порошок хранят в хорошо закупоренной стеклянной банке в сухом месте.
|
Ход исследования:
|
Предметное стекло кладут на лист
фильтровальной бумаги. На стекло помещают небольшое количество (на кончике
ножа) сухого реактива или таблетку и наносят на него 2 – 3 капли мочи.
|
Интерпретация
полученных результатов:
|
При наличии кетоновых тел
получается окрашивание от розового до темно-фиолетового (появление окраски
может наступить в течение 2 – 3 мин).
|
|
|
|
Экспресс-тесты
К экспресс-тестам определения
кетоновых тел в моче относятся: набор для экспресс-анализа ацетона в моче и
диагностические полоски. Исследование проводится согласно инструкции.
Задание №5.
ü
Изучите инструкцию к диагностическим тест-полоскам
фирмы ФАН и БИОСЕНСОР АН, перепишите её в тетрадь;
ü
Получите образцы биологической жидкости и
тест-полоски у преподавателя и проведите самостоятельное исследование мочи;
ü
Результат запишите в бланки анализа;
ü
Оцените полученный результат с позиции
«норма-патология» и сдайте преподавателю.
Принцип
определения кетоновых тел с использованием тест-полосок ФАН
Принцип основан на:
полуколичественном
определении кетонов. Диагностическая зона пропитана щелочным буфером и
нитропруссидом натрия, который при низких величинах ph (в
щелочной среде) вступает в реакцию с ацетоуксусной кислотой и ацетоном,
вследствии чего образуется комплекс коричневато-красного цвета. Интенсивность
окраски прямопропорциональна количеству кетонов в исследуемой моче.
Чувствительность и специфичность:
Чувствительность
зоны к ацетоуксусной кислоте составляет 0,5 ммоль/л, для ацетона – 10 ммоль/л.
Оценка теста
Цветная
шкала диагностической тест полоски с 2004 года представлена 4 зонами:
1
зона: бледно-желтая – отрицательная;
2
зона: розово-бежеватого цвета – соответствует15
ммоль/л (16мг/дл);
3
зона: насыщенного бежевато-розоватого цвета –5,0
ммоль/л (53 мг/дл);
4
зона: коричневато-красного цвета – соответствует 15
ммоль/л (160 мг/дл).
Интерпретация полученных результатов:Реакция оценивается через 60 сек после погружения диагностической
полоски в мочу, путем сравнения образовавшейся окраски реагентной зоны с
цветовой шкалой (стандартом). Если результат лежит между двумя цветовыми
квадратами, то результат оценивают по наиболее близкой по окраске зоне цветовой
шкалы.
Положительным
результат считается, если диагностическая зона при контакте с исследуемой мочой
принимает тот или иной оттенок цветной шкалы.
Принцип
определения кетоновых тел с использованием тест-полосок фирмы БИОСЕНСОР АН
Данные
тест-полоски предназначены для определения двух важных показателей (глюкозы и
кетоновых тел в моче), что очень важно в диагностике и контроле показателей у
больных Сахарным диабетом.
1
|
Тщательно перемешайте мочу стеклянной палочкой;
|
2
|
Произведите отбор 10мл мочи для исследования мочевого осадка;
|
3
|
Затем возьмите строго необходимое количество тест-полосок для
исследования мочи (ровно столько сколько у Вас образцом мочи);
|
4
|
Закройте пенал фабричной крышкой;
|
5
|
Опустите тест-полоску в мочу на 2-3 сек, так чтобы все
реагентные зоны были в моче;
|
6
|
Выньте тест-полоску из мочи, убрав излишки жидкости ребром
полоски о край посуды или промокните ребром полоски о фильтровальную бумагу;
|
7
|
Положите тест-полоску на ровную поверхность диагностическими
зонами вверх;
|
8
|
Оцените полученный результат через 60 сек с цветовой шкалой
(стандартом) на пенале.
|
9
|
Запишите полученный результат в бланки анализа.
|
Диапазон
определяемых концентраций глюкозы в моче:
0,0 0,05 0,1
0,25 0,5 1,0 ≥ 2,0 %
0,0 2,8 5,6 14,0
28,0 56,0 ≥ 112,0 ммоль/л
0,0 50 100 250
500 1000 ≥ 2000 мг/дл
Диапазон
определяемых концентраций кетоновых тел в моче:
0,0; 0,5; 1,5; 4,0; 8,0;
16,0 ммоль/л
0,0 0,5
1,5 4,0 8,0 ≥ 16.0 ммоль/л
Факторы, влияющие на определение кетоновых тел в моче
При оценке
результатов проб на кетоновые тела в моче следует учитывать ряд факторов. Так,
например, известно, что ацетоуксусная кислота в стерильной моче стабильна до 8
— 10 дней, при бактериурии или большом количестве дрожжевого грибка может
полностью исчезнуть в течение 24 часов. Около 20% ацетона при комнатной
температуре исчезает за 24 часа, но сохраняется в холодильнике. Поэтому важное
значение имеет правильный сбор мочи, ее хранение и сроки выполнения анализа.
Кроме того, кетоновые тела могут исчезать из мочи при бактериурии и invivo, что
может привести к ложноотрицательным результатам.
К
ложноположительным результатам может привести
использование месны, фенолфталеина, метаболитов некоторых препаратов (например,
леводопы и каптоприла, капотена, менса и др.); кислая моча, повышенный удельный
вес мочи. Все эти факторы приводят к химическому завышению результатов анализа,
то есть непосредственно влияют на химическую реакцию определения кетоновых тел
в моче, а количество самих кетоновых тел в моче может быть нормальным.
Необходимо
помнить, что существуют также факторы, приводящие к
клиническому повышению кетоновых тел в моче, то есть непосредственно влияющих
на их уровень в моче за счет воздействия на обменные процессы, связанные с
образованием кетоновых тел. К таким фактором относится прием некоторых
лекарственных препаратов — инозитола, метионина, метформина, фенформина,
феназопиридина, эфирного наркоза, интоксикация изониазидом, изопропиловым
спиртом, ацетилсалициловой кислотой.
IIIМодуль. Контрольные вопросы и
задания
a)
Ответьте
на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь
1. Как называется состояние, когда в моче
обнаруживаются кетоновые тела?
2. Обнаруживаются ли в норме кетоновые тела? В каком
количестве? Как называется такое количество в клинической практике?
3. Какие кетоновые тела Вам известны?
4. Какие факторы способствуют появлению в моче
кетоновых тел? Разделите их на группы с позиции «физиологические состояния» и
«патологические состояния».
5. Какие изменения в крови и моче характерны для
больного сахарным диабетом?
6. Какие изменения в крови и моче характерны для
больного лейцинозом?
7.
Как
образуются кетоновые тела?
8.
Какие существуют методы определения кетоновых тел в моче?
9.
Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью пробы Лестраде? На чем
основан принцип метода? Ход определения?
10.
Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью пробы Ланге? На чем
основан принцип метода? Ход определения?
11.
Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью пробы Легаля? На чем
основан принцип метода? Ход определения?
12.
Расскажите метод определения кетоновых тел с помощью пробы Ротеры? На чем
основан принцип метода? Ход определения?
13. Расскажите метод
определения кетоновых тел с помощью диагностических тест-полосок?
14. Назовите основные принципы работы с
тест-полосками?
15. Какие факторы, влияют
на определение кетоновых тел в моче?
16. Дайте определение понятиям: кетонемия, кетонурия,
лейциноз.
b) Запишите в
рабочей тетради термины и дайте им обозначение, используя изученный материал
Кетонурия
|
|
Кетонемия
|
|
Лейциноз
|
|
с)
ПРОВЕРЬТЕ ВАШИ ЗНАНИЯ
Оставьте свой комментарий
Авторизуйтесь, чтобы задавать вопросы.