Геннотерапевтический остеопластический материал

• 1 слайд

  Геннотерапевтический остеопластический материал
  Институт Стволовых Клеток Человека
  Московский государственный медико-стоматологический университет
  Санкт-Петербургский государственный медицинский университет
  им. акад. И.П. Павлова
  НИЦ «Курчатовский институт»
  Институт общей генетики РАН им. Н.И. Вавилова
  И.Я. Бозо, Р.В. Деев , А.Ю. Дробышев, Д.В. Галецкий, В.О. Королев, Е.С. Филоненко , С.Л. Киселев
  Москва-Уфа, 2012
  

• 2 слайд

  Геннотерапевтический остеопластический материал
  Изделие медицинского назначения, состоящее из носителя и активного компонента – генных конструкций, определяющих специфику механизма действия материала
  Терапевтический ген(ы)
  +
  Вектор
  (система доставки)
  Генные конструкции
  Носитель
  Геннотерапевтический остеопластический материал
  

• 3 слайд

  Механизм действия геннотерапевтического остеопластического материала
  Трансфекция in vivo
  ДНК-плазмиды с терапевтическим
  геном
  Клетки как «биореакторы» терапевтического белка
  Остеоиндуцирующий фактор
  Высвобождение генных конструкций из структуры носителя
  Репаративнй остеогенез
  Клетки-мишени
  

• 4 слайд

  Лабораторный этап
  Отбор из представленных на рынке остеопластических материалов тех носителей, с которыми ДНК-плазмиды могут образовать химическую связь
  Эксперимент in vivo
  Оценка эффективности геннотерапевтических материалов в замещении костных дефектов
  Цель исследования
  Проверка концепции, предполагающей возможность использования генных конструкций в качестве активных компонентов разрабатываемых костнозамещающих материалов.
  
  Дизайн исследования
  

• 5 слайд

  Материалы и методы
  1. Генные конструкции на основе субстанции «Камбиогенплазмид», представляющую собой сверхскрученную плазмидную ДНК с геном сосудистого эндотелиального фактороа роста (pVEGF165) .
  2. Ряд различных по составу остеопластических материалов (синтетические и природные на основе коллагена, гидроксиапатита, трикальцийфосфатов).
  
  Лабораторный этап – отбор двух носителей, способных связывать наибольшее количество гДНК-плазмид, состоящий из совмещения материалов и субстанции, отмывки, элюирования связавшейся с носителем фракции субстанции и измерения её количества с помощью спектрофотометрии.
  Кролики (n=22, 2,5-3,0 кг.), 15, 30, 60 сут. Симметричные дефекты (8 мм) обеих теменных костей, в один имплантировали целевой материал, в контрлатеральный– носитель без генов/ без имплантации :
  Методы оценки:
  Конусная КТ
  -Гистологический анализ
  

• 6 слайд

  Результаты лабораторного этапа
  
  Концентрация рVEGF165, образовавших химическую связь с носителем:
  1. Синтетический -трикальцийфосфат российского производства – 2 нг/мг;
  2. Ксеногенная костная ткань – 12– 44,9 нг/мг ;
  3. Аллогенная костная ткань – 10 нг/мг
  4. Различные варианты комбинированных материалов на основе гидроксиапатита,
  -трикальцийфосфата и коллагена – 5 – 38 нг/мг
  7. Синтетический материал на основе коллагена и гидроксиапатита – 625 мг/нг
  
  Выбор: синтетический материал на основе коллагена и гидроксиапатита; ксеногенная костная ткань .
  

• 7 слайд

  Результаты: 15 суток
  Синтетический материал с рVEGF165
  Контроль
  Ксеногенный материал с рVEGF165
  Дефект без имплантации
  

• 8 слайд

  Результаты: гистологический анализ
  Синтетический материал с pVEGF165
  Синтетический материал без pVEGF165
  

• 9 слайд

  Результаты: 30 суток
  Синтетический материал с pVEGF165
  
  Синтетический материал без pVEGF165
  
  Ксеногенный материал с pVEGF165
  Ксеногенный материал без pVEGF165
  

• 10 слайд

  Результаты эксперимента, 45 суток
  Синтетический материал с pVEGF165
  
  Синтетический материал без pVEGF165
  Ксеногенный материал с pVEGF165
  
  Ксеногенный материал без pVEGF165
  

• 11 слайд

  Результаты эксперимента, 45 суток
  Синтетический материал с pVEGF165
  
  3D – реконструкция
  
  

• 12 слайд

  Результаты: гистологический анализ
  Ксеногенный материал с pVEGF165
  Ксеногенный материал без pVEGF165
  

• 13 слайд

  Результаты, 60 суток
  Синтетический материал с pVEGF165/ контроль
  Ксеногенный материал с pVEGF165/
  контроль
  
  

• 14 слайд

  Результаты гистоморфометрии
  15 суток
  30 суток
  45 суток
  Без имплантации
  

• 15 слайд

  Выводы:
  Гипотеза о том, что генные конструкции в качестве активного компонента костнозамещающего материала способны усилить остеоиндуцирующий потенциал изделия, подтверждена.
  Необходимо выполнение дальнейших исследований для более детального обоснования эффективности и механизма действия геннотерапевтического остеопластического материала
  

• 16 слайд

  Спасибо за внимание!