МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
ДЛЯ СТУДЕНТОВ МЕДИЦИНСКИХ КОЛЛЕДЖЕЙ И УЧИЛИЩ
Тема:
«Культивирование бактерий.
Изучение культуральных и биохимических свойств
бактерий»
Дисциплина: Основы микробиологии и иммунологии
Вид занятия: Практическое
Количество часов: 2
Автор:
Е.А. Ивлева –
преподаватель высшей квалификационной категории
Государственного бюджетного профессионального
образовательного учреждения
Департамента здравоохранения города Москвы
«Медицинского колледжа № 6»
Содержание
методической
разработки:
1. Методический
блок
Ø Рекомендации по усвоению темы
Ø Инструкция для самостоятельной
работы студентов
2. Информационный блок
Ø Бактериологическое исследование
Ø Посев штрихом
Ø Ферменты бактерий
Ø Дифференциально-диагностические среды
Ø Расщепление белков (протеолитические
свойства)
Ø Способность расщеплять эритроциты
(гемолитическая активность)
Ø Расщепление углеводов
(сахаролитическая активность)
3. Иллюстративный
блок
4. Самостоятельная
работа
Ø Задание № 1
Ø Задание № 2
Ø Задание № 3
5. Литература
и интернет источники
МЕТОДИЧЕСКИЙ БЛОК
Практическое занятие
Тема: «Культивирование
бактерий. Изучение культуральных и биохимических свойств бактерий»
Время проведения: 2 часа
Место проведения: кабинет
микробиологии
Рекомендации по усвоению темы:
Общая цель занятия:
Овладение знаниями и умениями по бактериологическому методу исследованию,
освоение общих компетенций ОК 1, ОК 6, 7, 8, ОК 12.
Требования к умениям:
Уметь:
Ø Изучать
культуры бактерий на питательных средах
Ø Проводить
сравнительную характеристику колоний
Требования к
знаниям:
Знать:
Ø Питательные
среды, применяемые в лабораторной практике для культивирования бактерий
Ø Основные
этапы бактериологического исследования и методы посева культуры на питательные
среды
Инструкция для
самостоятельной работы студентов:
Уважаемые студенты! Выполняйте
задания самостоятельно, начиная с первого пункта, не приступайте к следующему
заданию, пока не выполнили предыдущее.
1. Познакомьтесь с целями
данного практического занятия.
2. Повторите этапы
бактериологического исследования.
3. Используя информационный и
иллюстративный блоки, изучите ферментативные особенности бактерий.
4. Выполните задания для
самостоятельной работы –
задание № 1,
задание № 2
5. Ответьте на вопросы – задание
№ 3.
6. В конце работы оцените,
достигли ли Вы целей занятия.
ИНФОРМАЦИОННЫЙ
БЛОК
Бактериологическое исследование
Бактериологическое
исследование – один из основных видов работы микробиологической лаборатории.
Его цель- выделение из исследуемого материала чистой культуры и ее
идентификация.
Выделенная и идентифицированная до вида чистая культура позволяет изучать
различные интересующие признаки (наличие факторов вирулентности, токсигенности
и др.), а также проводить ее внутривидовую дифференцировку.
А — разливка агара в чашки Петри;
Б — посев смеси микробов в чашку;
В — отсев колоний с чашек при помощи платиновой петли;
Г — пересев в пробирку на поверхность скошенного агара
Посев штрихом
! См. иллюстрации и описание А-Д
А.
Чашка разделена на три
сектора.
Б.
Петлей с культурой зигзагом наносят штрихи
на поверхность
агара в секторе 1
В.
Проводят петлей по поверхности
среды в
секторе 1, как показано
на рисунке, В
и затем немедленно
наносят ею зигзагом
штрихи на поверхности
среды в секторе 2.
Г.
Проводят петлей по
поверхности среды
в
Г
секторе 2, как показано,
и затем наносят ею
зигзагом штрихи на поверхности
среды в секторе 3.
Д.
В секторе 1 вырастает
большое число
колоний,
Д
тогда как в секторах 2
и 3 появляются
отдельные хорошо
изолированные колонии.
Ферменты бактерий
Ферментный
состав бактерий является постоянным, а различные виды микробов четко
различаются по набору ферментов.
Изучение
ферментативного состава имеет важное значение для идентификации различных
микроорганизмов.
По ферментному
составу можно установить видовую и типовую принадлежность бактерий, а также
варианты (биовары).
Дифференциально-диагностические среды
Дифференциально-диагностические среды — специальные смеси питательных веществ,
применяемые для определения видовой принадлежности микробов и изучения их
свойств.
При
росте бактерий на дифференциально-диагностических средах протекают химические
процессы, обусловленные наличием у микробной клетки различных ферментов.
Одни
из них способны расщеплять белки, другие — углеводы, третьи — вызывать реакции окисления
и восстановления и т. д. Благодаря действию ферментов в
дифференциально-диагностической среде происходят соответствующие изменения.
Рис. 1—6. Различные формы расщепления
желатины.
Рис. 7 — 9. Жидкая среда с углеводом и
индикатором Андраде: рис. 7 — отсутствие ферментации; рис. 8 — ферментация с
образованием кислоты; рис. 9 — ферментация с образованием кислоты и газа.
Рис. 10 — 12. Полужидкая среда с углеводом и
индикатором BP (из сухой питательной среды): рис. 10 — отсутствие ферментации;
рис. 11 — ферментация с образованием кислоты; рис. 12 — ферментация с
образованием кислоты и газа.
Рис. 13—15. Искусственная лакмусовая сыворотка
по Зейтцу: рис. 13 — отсутствие ферментации; рис. 14 — ферментация с
образованием кислоты; рис. 15 — ферментация с образованием щелочи.
Рис. 16 и 17. Молоко с метиленовым синим:
рис. 16 — отсутствие редукции; рис. 17 —редукция.
Рис. 18 и 19. Среда Симонса: рис. 18
—отсутствие ассимиляции цитрата; рис. 19 — ассимиляция цитрата.
Рис. 20 — 24. Лакмусовое молоко: рис. 20 — отсутствие
ферментации; рис. 21 — ферментация с образованием кислоты; рис. 22 —
ферментация с образованием щелочи; рис. 23 — пептонизация; рис. 24 — редукция.
Рис. 25. Разжижение свернутой сыворотки (в проходящем свете).
Рис. 26. Гемолиз на кровяном агаре (в
проходящем свете).
Рис. 27. Кровяная среда с теллуритом калия.
Расщепление белков
(протеолитические
свойства)
Изучают на средах с желатином, молоком, сывороткой, пептоном.
При
росте на желатиновой среде, микробов ферментирующих желатин, среда разжижается.
Характер разжижения различен.
Микробы, расщепляющие молочный белок (казеин) вызывают пептонизацию молока –
оно приобретает вид молочной сыворотки.
При
расщеплении пептонов могут выделяться – индол, сероводород, аммиак. Их
образование можно установить с помощью индикаторных бумажек.
Среды, содержащие белок и выявляющие способность микробов расщеплять белки
(протеолитические свойства):
Ø
мясо-пептонный желатин («столбиком»),
Ø
свернутая лошадиная или бычья сыворотка,
Ø
молоко.
При
посеве бактерий проколом в мясо-пептонный желатин, «столбиком» в случае
расщепления белка наблюдают разжижение среды.
При
посеве на среду со свернутой сывороткой расщепление белка определяют по
разжижению среды и образованию углублений на ее поверхности.
Расщепление микробом молока выявляется просветлением или растворением
первоначально свернувшегося молока.
Способность
расщеплять эритроциты
(гемолитическая
активность)
Изучают на
средах с кровью.
Жидкие
среды становятся прозрачными, а на плотных средах вокруг колонии появляется
прозрачная зона. При образовании метгемоглобина среда зеленеет.
Наличие гемолитической активности исследуемой культуры проверяют посевом ее в чашку Петри на специальный кровяной агар.
Расщепление
углеводов
(сахаролитическая
активность)
Способность
расщеплять сахара и многоатомные спирты с образованием кислоты или кислоты и
газа.
Среды для выявления способности микробов расщеплять углеводы и высокоатомные спирты (Эндо среда, Левина среда, Расселла
среда, Дригальского — Конради среда, Рапопорт — Вайнтрауба среда, Шустовой
среда).
Для
выявления этих свойств микроорганизмов применяют также «пестрый» ряд, т. е.
серию пробирок, содержащих питательные среды,
включающие различные углеводы, многоатомные спирты и индикатор.
Разложение какого-либо из углеводов с образованием кислоты выявляют по
изменению цвета индикатора, образование газа— по заполнению газом и всплыванию
специального стеклянного поплавка в жидкой среде.
Или
применяют полужидкие Гисса среды с соответствующими сахарами и индикатором
Андраде.
После посева микроба на эти среды образование кислоты выявляют покраснением
среды, а образование газа — по появлению его пузырьков в агаре или по разрыву и
сдвигу вверх агарового столбика.
ИЛЛЮСТРАТИВНЫЙ
БЛОК
Агар
Эндо
Плотная
дифференциально-диагностическая среда,
используемая
для выделения и первичной идентификации энтеробактерий
Escherichia coli Klebsiella pneumoniae
Salmonella enterica Shigella flexneri
Агар МакКонки
Селективная среда для выделения
сальмонелл, шигелл,
колиформных бактерий из мочи,
пищевых продуктов, сточных вод и др.
Escherichia coli Klebsiella pneumoniae
Salmonella enterica
Pseudomonas aeruginosa
Кровяной
агар
Специальная бактериологическая
среда, служащая для выделения
бактерий и установления их
гемолитической активности.
Streptococcus
pneumoniae Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Enterococcus
faecalis
Дезоксихолат-цитратный
агар
Селективный агар для
выделения и дифференциации патогенных энтеробактерий
и вибрионов из разного
материала.
Klebsiella pneumoniae Proteus mirabilis
Pseudomonas aeruginosa Salmonella enterica
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ
РАБОТА
ЗАДАНИЕ
№ 1.
Изучить
ферментативную активность золотистого стафилококка и гемолитического
стрептококка. Провести сравнительную характеристику. Результаты занести в
таблицу.
|
Золотистый стафилококк
|
Гемолитический стрептококк
|
Ферменты патогенности:
|
|
|
Протеолитические свойства:
|
|
|
Белок молока (казеин)
|
|
|
Желатин
|
|
|
Сахаролитические свойства:
|
|
|
лактоза
|
|
|
глюкоза
|
|
|
сахароза
|
|
|
мальтоза
|
|
|
+ положительная реакция
- отрицательная реакция
К – расщепление с образованием кислоты
ЗАДАНИЕ
№ 2.
Изобразить
золотистого стафилококка и гемолитического стрептококка
1) Мазок под микроскопом, окрашенный по методу Грама
Стафилококк Стрептококк
2) Рост на элективной питательной среде в чашке Петри
Желточно-солевой
агар Кровяной агар
Колонии стафилококка
Колонии стрептококка
ЗАДАНИЕ № 3.
Дать ответы на вопросы:
- Перечислите
основные требования, которые предъявляют к питательным средам.
- Что
входит в понятие «культуральные свойства бактерий»?
- Каким
должен быть рН сред для культивирования большинства патогенных бактерий?
- Какие
вещества служат для уплотнения питательных сред?
- Дайте
определение понятию «чистая культура».
- Что
такое бактериологическое исследование?
- Приведите
примеры простых питательных сред и сложных питательных сред.
Литература и
интернет источники
1.
Воробьев А.А. , Кривошеин Ю.С. – «Основы
микробиологии, вирусологии, иммунологии», Москва «Мастерство» 2011
2.
Прозоркина Н.В., Рубашкина Л.А. – «Основы
микробиологии, вирусологии, иммунологии», Ростов на Дону «Феникс» 2010
3.
http://collegemicrob.narod.ru/microbilogy/index.html
Микробиология
4.
http://microbiology.ucoz.org/photo/kolonii_mikrobov_semejstva_kishechnykh/1-0-4
Фото бактерий
Оставьте свой комментарий
Авторизуйтесь, чтобы задавать вопросы.