Методическая разработка практического занятия по МДК.04.01 №34

ГАОУ  СПО РК

«Евпаторийский медколледж»

План занятия (практическое) № 34

Тема занятия:     Проведение микробиологической диагностики шигеллезов.

МДК.04.01.    Теория и практика  лабораторных микробиологических и иммунологических исследований

Специальность:   31.02.03. Лабораторная диагностика

Курс:                      2-ой

Цели занятия:

Образовательные:

·        Изучить микробиологическую диагностику шигелл

·        Рассмотреть биохимические свойства шигелл

·        Рассмотреть идентификацию шигелл

Развивающие:

·         Развивать навыки самообразования, творческие способности студентов

·        Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений;

·        выделять главное и существенное

·        устанавливать причинно-следственные связи

Воспитательные:

·        продолжить формирование эволюционных представлений о развитии органического мира, передачи наследственного материала

·        воспитывать уважение к людям, науки, их достижениям

·        продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения

·        продолжить формирования здорового образа жизни

Междисциплинарные связи:

1.     Биология

2.     Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ

3.     Анатомия и физиология человека

4.     Гигиена

Внутридисциплинарные связи:

1.     Общая микробиология

2.     Иммунология

3.     Санитарная микробиология

Место проведения: кабинет 407

Тип занятия:            практическое

Количество часов:  4 академических

Обеспечение занятия: мультимедийное оснащение, таблицы, слайды, стол лаборанта, питательные среды, чистые культуры микроорганизмов

Литература:

     Основные источники:

1. Ф.К.Черкес, Л.Б.Богоявленская, Бельская Н.А. «Микробиология»

М: Альянс 2014г.

2. Камышева К.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии /  Ростов н/Д: Феникс, 2015. – 281 с.

Дополнительные источники:

1.         Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: в 2 т. /                                                                 под ред. В. В. Зверева, М. Н. Бойченко. – Том 1. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 448 с.

2.         Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник. Сбойчаков В.Б. 2011. – 608 с

3.         Медицинская и санитарная микробиология: учебное пособие для студентов высш. Мед. Учебн. Заведений/ А.А. Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков – 3-е изд., стер. – М.: Издательский центр «Академия», 2008. – 464 с., л.цв. вкл.

 Интернет- ресурсы:

1.  МедУнивер – медицинский информационный портал для интересующихся… Общая микробиология. Meduniver.com

2.  Сайт http://rospotrebnadzor.ru/

Студент должен уметь:

1.     Проводить взятие и посев биологического материала для выделения шигелл

2.     Выделять и изучать чистую культуру шигелл

3.     Проводить постановку серологических реакций

4.     Проводить учет результатов

Студент должен знать:

1.     Морфологию шигелл

2.     Культуральные, биохимические и серологические свойства шигелл

3.     Методики приготовления, окрашивания, микроскопирования препаратов микроорганизмов

4.     Патогенез и эпидемиологию инфекций, вызываемых шигеллами

Студент должен обладать:

Общие компетенции

ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.

ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.

ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.

ОК 6. Работать в коллективе и команде, эф­фективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.

ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.

ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации.

ОК 9. Ориентироваться в условиях  смены технологий в профессиональной деятельности.

ОК 10. Бережно относиться к историческому наследию и культурным традициям народа, уважать социальные, культурные и религиозные различия.

ОК 11. Быть готовым брать на себя нравственные обязательства по отношению к природе, обществу, человеку.

ОК 12. Оказывать первую медицинскую помощь при неотложных со­стояниях.

ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.

ОК 14. Вести здоровый образ жизни, заниматься физической культурой и спортом для укрепления здоровья, достижения жизненных и профессиональных целей.

Профессиональные компетенции

ПК 4.1. Готовить рабочее место и аппаратуру для проведения ­ лабораторных микробиологических исследований.

ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов; участвовать в контроле качества.

ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований

ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.

Структура занятия:

1.     Организационный момент                                                                2 мин.

2.     Мотивация (цели) занятия                                                              3 мин.

3.     Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 45 мин.

4.     Инструктаж самостоятельной работы студентов                         15 мин.

5.     Практическая часть                                                                         105 мин.

6.     Подведение итогов занятия, оценка работы студентов                8 мин.

7.     Задание на дом                                                                                 2 мин.

 Ход занятия

1.                 Организационный момент

 (Приветствие, проверка присутствующих, внешнего вида студентов, сообщение темы, учебных целей занятия) 

Инструктаж по охране труда (роспись в журнале по технике безопасности)

Мотивация  (цели)  занятия:

Изучение микробиологической диагностики шигеллезов как причины кишечных инфекций (дизентерии) является обязательным разделом профессионального модуля в связи с распространенностью данных микроорганизмов и инфекций, вызываемых ими.

             Мотивация: ОК.1-ОК.14; ПК.4.1-4.4; 

 Актуальность:

Тема практического занятия «Проведение микробиологической диагностики  шигеллезов» подготавливает базу для производственной практики и ориентирована на конечную цель подготовки специалистов в соответствии с требованиями.  Роль и значение кишечных инфекций  в клинической и профилактической медицине обосновывают важность знаний, которыми должны овладеть студенты в процессе освоения данной темы. Изучение свойств кишечной палочки и механизмов реализации патологического процесса с учетом роли иммунной системы позволит организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы исследования кишечных инфекций и способы выполнения профессиональных задач. Выявление кишечных палочек как причины  загрязнения окружающей среды, а также как причины оппортунистических инфекций увеличивает значение профилактических мероприятий.

Таким образом,  изучение методов исследования шигелл, особенностей их взаимодействия с организмом хозяина и иммунной системой, а также вопросы диагностики, профилактики и антимикробной терапии, являются неотъемлемой частью формирования компетентностного подхода в подготовке медицинского лабораторного техника.

Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний):

а) проверка знаний: устный опрос

Тестовый контроль (приложение №1)

б) проверка внеаудиторной самостоятельной работы

таблицы, кроссворды, рисунки по темам.

в) подведение итогов контроля:

Оценивание, замечания по работе.

2.                 Практическая часть:

а) подготовка студентов к самостоятельной работе (проведение инструктажа по выполнению заданий):

Проведение анализа Засеять исследуемую чистую культуру штрихом по поверхности скошенной среды и затем уколом по центру столбика в его толщу в той же пробирке. Инкубировать до 48 ч при 35°С. Среда Клиглера может быть модифицирована по Bader и Hotz (1951) добавлением 0,2 % мочевины. Контроль качества Тест-штаммы Рост Цвет столбика Цвет скошенной поверхности Escherichia coli ATCC 25922 очень хороший желтый желтый Citrobacter freundii ATCC 8090 очень хороший желтый и черный желтый Enterobacter cloacae ATCC 13047 очень хороший желтый желтый Shigella flexneri ATCC 12022 очень хороший желтый красный Salmonella typhimurium ATCC 14028 очень хороший желтый и черный красный Salmonella enteritidis ATCC 13076 очень хороший желтый и черный красный Proteus mirabilis ATCC 14153 очень хороший желтый красный Proteus vulgaris ATCC 13315 очень хороший желтый и черный красный

Среда ацетатный агар 

Контроль качества:

Тест-штамм	Наблюдаемый эффект
E. coli 3912/41 (055:К59)	изменение цвета среды из зеленого в синий
K. pneumoniae 3534/51	изменение цвета среды из зеленого в синий
E. coli 0124 Ewing 227	изменение цвета среды из зеленого в синий
S. sonnei «S form»	без изменения цвета среды

Микробиологическое исследование

Цель исследования: выявление и идентификация шигелл для постановки диагноза; выявление бактерионосителей; обнаружение шигелл в пищевых продуктах.

Материал для исследования

1. Испражнения.

2. Секционный материал.

3. Пищевые продукты.

Способы сбора материала

Способы сбора материала

Основные методы исследования

1. Микробиологический.

2. Серологический.

Ход исследования

Первый день исследования

Первый день исследования

Второй день исследования

Засеянные чашки вынимают из термостата, просматривают невооруженным глазом или через лупу. Подозрительные колонии (бесцветные) в количестве 4-6 отсевают на среду Рассела и маннит. Посев производят штрихами по скошенной поверхности и уколом в агаровый столбик. Засеянную среду Рассела помещают в термостат на 18-24 ч (параллельно делают пересев из селенитовой среды на дифференциальные среды).

Третий день исследования

Вынимают посевы, сделанные на среду Рассела, из термостата. Культуры, не расщепившие лактозу, подвергают дальнейшему изучению: делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии грамотрицательных палочек производят посев на среды Гисса, бульон с индикаторными бумажками (для выявления индола и сероводорода) и на лакмусовое молоко. Засеянные среды ставят в термостат на 18-24 ч.

Четвертый день исследования

Вынимают посевы из термостата и учитывают результат. Культуры, подозрительные по своим ферментативным и культуральным свойствам в отношении шигелл (см. табл. 37), подвергают серологической идентификации. При отсутствии таких культур дают отрицательный ответ.

Серологическая идентификация

Вид, серовар, подсеровар выделенной культуры устанавливают при помощи адсорбированных сывороток. Анализ антигенной структуры начинают с реакции агглютинации на стекле со смесью № 1. В эту смесь входят сыворотки с антителами к шигеллам Зонне, Ньюкасл и поливалентная сыворотка к шигеллам Флекснера. При положительной реакции агглютинации со смесью выделенную культуру агглютинируют отдельно с каждой сывороткой, входящей в смесь.

Положительная реакция агглютинации с адсорбированной сывороткой к шигеллам Зонне и Ньюкасл дает право дать ответ. Для установления серовара и подсеровара шигелл Флекснера необходимо дополнительно поставить реакции агглютинации с типовыми (I, II, III, IV, V) и групповыми (1-3, 4-6-7, 8) сыворотками. Например, выделенная культура дала положительную реакцию с типовой сывороткой II и групповой сывороткой 3, 4. Как видно из таблицы, выделена культура шигелл Флекснера, серовар 2, подсеровар 1а. Ответ: выделены шигеллы Флекснера 2а.

При отсутствии агглютинации со смесью № 1 ставят реакцию агглютинации с другими поливалентными сыворотками.

При постановке реакции агглютинации следует учитывать отношение изучаемой культуры к манниту и в зависимости от этого использовать ту или иную сыворотку. Так культуры, не расщепляющие маннит, испытывают с поливалентными сыворотками к шигеллам дизентерии Григорьева - Шиги и Штутцера - Шмитца (1, 2), Лардж - Сакса (3-7), провизорным типам (8-10).

Культуры, расщепляющие маннит, испытывают со смесью № 1 и поливалентными сыворотками к шигеллам Бойда.

При наличии агглютинации выделенной культуры одной из этих сывороток проводят испытание культуры с каждой из сывороток, входящих в поливалентную. Положительный результат с одной из сывороток определяет серовариант выделенной культуры.

При использовании сыворотки к шигеллам Бойда агглютинацию начинают с сывороткой того серовара, который наиболее часто встречается в данной местности. В нашей стране чаще выделяют шигеллы Бойда серовариантов 4, 5, 7, 9 и 12 (см. рис. 44).

В качестве ускоренных методов микробиологического исследования при дизентерии применяют люминесцентную микроскопию и биологическую пробу на морских свинках. При введении вирулентных штаммов шигелл в конъюнктивальный мешок (под нижнее веко) к концу 1-х суток у животных развивается конъюнктивит.

б) самостоятельная работа студентов:

1.     провести посев изучаемой культуры на среду Клиглера

2.     Сделать мазки с агаровой культуры, окрасить по Граму

3.     Микроскопировать препараты, зарисовать в дневник

4.     зарисовать схему выделения чистой культуры шигелл

5.     Сделать выводы  

в) подведение итогов самостоятельной работы

Оформление в рабочей тетради выводов о проделанной работе

 Итоговый контроль

Решение ситуационных задач (см.приложение №2)  

Проверка преподавателем работ студентов

3.                 Задание на дом

Подготовка по теме «Семейство кишечных бактерий. Сальмонеллы»

Подведение итогов занятия, оценка работы студентов

Преподаватель оценивает работу студентов, корректирует ошибки, отвечает  на вопросы студентов

Преподаватель  Гончарова А.И.

Приложение №1

Тесты подстановки:

1.     Согласно международной схеме классификации род шигелл включает 4 вида(подгрупп): A-Sh.dysenteruae, B- Sh._____________________, C-Sh.-boydii,

 D-Sh._______________________

2.     Шигеллы грамм-_________________, по типу дыхания_____________________.

3.     На средах растут в виде __________________ _____________________________

4.     Разделение на виды основано на определении биохимических характеристик и ___________________ строения.

5.     Шигеллы длиной 2..3мкм имеют форму _________________ с закругленными концами, лишены капсул и ____________________________.

6.     Шигеллы не расщепляют ____________ и сахарозу, исключение составляет___________________________

7.     Шигеллы делятся на две группы :расщепляющие и нерасщепляющие _____________.

8.     Шигеллы обладают слабыми протеолитическими свойствами, молоко ____________, желатин _______________________.

9.     Sh.dysenteruae обладают способностью продуцировать ____________________ , обладающий выраженным тропизмом к нервной системе и слизистой оболочке кишечника. Остальные подгруппы дизентерийных бактерий образуют _______________.

10. Успех лаб. Иссл=ия во многом зависит от правильного_________________  ______________ и посева на элективно-дифференциальные среды.

11. На исследование брать нужно______________     порции кала, так как шигеллы локализуются в слизистой оболочке __________________ кишечника.

12. Заболевание, вызванное шигеллами Шиги протекает  с отеком, гиперемией толстого кишечника и ___________________________.

13. Накопительная среда для шигелл- ______________________________

14. Дифференциальные среды для шигелл- это среда __________________,

Среда_____________ и ________________.

Приложение №2

Задача №3. В детском коллективе наблюдается вспышка острых кишечных заболеваний, соответствующих по клинической картине дизентерии. Заболевание связано по времени с приходом на работу новой няни.

1) Как установить источник инфекции?

2) Какие микробиологические исследования нужно провести с этой целью?

Ответ к задаче №3:

Для установления источника инфекции необходимо произвести бактериологическое исследование испражнений у работников пищеблока и няни. При выделении шигелл произвести серо- и фаготипирование выделенных культур (определить эпидмаркеры).

Задача №6. На даче старшая и младшая группы детсада жили раздельно, не общались друг с другом. Питание готовилось на одной и той же кухне. В младшей группе в начале лета имела место вспышка бактериальной дизен­терии. Через некоторое время случаи заболевания зарегистрированы и в старшей группе.

1) Где искать источник инфекции?

2) Как установить наличие одного или нескольких источников инфек­ции имело место?

Ответ к задаче №6:

1) Источник инфекции необходимо искать среди работников пищеблока.

2) Необходимо определить эпидмаркеры у всех выделенных культур при обследовании работников пищеблока и больных (фаговар, серовар, бактериоциновар). Если они совпадают – источник один, если разные – несколько источников инфекции.

Задача №7. В населенном пункте зарегистрирована вспышка дизентерии. Из фекалий больных детей выделена шигелла Зонне.

1) На основании каких признаков были идентифицированы выделенные культуры?

2) Какие необходимо провести дополнительные исследования для ус­тановления источника инфекции?

Ответ к задаче №7:

1) Выделенная культура шигелл Зонне идентифицирована по антигенным свойствам в реакции агглютинации и биохимическим свойствам (разложение всех углеводов короткого «пестрого» ряда до кислоты за 24-48 ч).

2) Для установления источника инфекции определяют эпидмаркеры: фаговар, бактериоциновар, серовар, антибиотикограмма.

Краткое описание документа:

Методическая разработка практического занятия по МДК.04.01 Теория и практика лабораторных микробиологических и иммунологических исследований предназначена для проведения практического занятия по разделу "Частная микробиология" на 2-ом курсе отделения Лабораторная диагностика и включает цели, требования к знаниям и умениям студентов, а также подробное описание техники микробиологического исследования при кишечных инфекциях.